Extracción e identificación de albúmina sérica bovina (informe experimental diseñado)
1. Salado: agregue 2 ml de suero bovino a un tubo de centrífuga, agregue una cantidad igual de PBS (solución salina tamponada con fosfato) para diluir el suero, agite bien y agregue. 2 ml gota a gota Agregue una solución saturada de sulfato de amonio con pH 7,2, agite bien, mezcle bien, luego deje reposar durante 10 minutos y luego centrifugue (2000 r/min) 65438.
2. ¿Coger una guía de colores limpia y poner una gota de reactivo de Nessler en cada pocillo?
3. Tome un trozo de celofán, dóblelo en una bolsa, vierta el sobrenadante centrifugado en la bolsa, ate bien la parte superior con un hilo (tenga en cuenta que queda un espacio) y cuélguelo con un hilo. varilla de vidrio en la bolsa medio llena. Coloque una taza de agua destilada en un vaso de precipitados de 100 ml, deje que la parte inferior de la bolsa de diálisis penetre en el agua y dialice la solución proteica. El líquido fuera de la bolsa (en el vaso de precipitados) generalmente se agita con una varilla de vidrio para acortar el tiempo de diálisis.
4. Comprobar cada 2 minutos, sustituir varias veces el agua destilada, utilizar el reactivo de Nessler para comprobar el NH4 del líquido fuera de la bolsa, observar el cambio de color y registrarlo hasta dializar la sal de la bolsa. .
5. Verter el líquido de la bolsa en el tubo de ensayo para obtener una solución de albúmina sérica bovina.
Método de identificación de la albúmina sérica bovina:
65438 La solución estándar se mancha una vez y el líquido de prueba se mancha tres veces.
2. Electroforesis: Coloque la tira de membrana punteada en el marco del tanque de electroforesis, con el lado esmerilado hacia abajo y el extremo punteado hacia el cátodo. Después de equilibrar durante 5 ± 5 minutos, encienda la alimentación, ajuste la fuente de alimentación, ajuste el voltaje del instrumento de electroforesis a 160 V y enciéndalo durante 60 minutos. Después de apagar la alimentación, use unas pinzas para quitar la tira de membrana.
3. Teñido: sumerja directamente la tira de película en la solución de teñido que contiene amino negro 10B, sáquela después de teñirla durante 2 minutos, sumérjala inmediatamente en la solución de enjuague y enjuague con las soluciones de enjuague 1, 2. y 3 durante 5 minutos respectivamente, hasta que el fondo se enjuague y la película se seque con papel de filtro.
4. Identifique y compare los resultados de la electroforesis de la albúmina en la muestra y la solución a probar en la película para ver si las posiciones son consistentes.
Datos ampliados:
Albúmina sérica bovina
La proteína simple del suero bovino es el principal componente de la sangre (38g/1000ml), con un peso molecular de 68kD. Punto isoeléctrico 4.8. El contenido de nitrógeno es 16 y el contenido de azúcar es 0,08. Contiene solo hexosa y hexosamina, y el contenido de grasa es solo del 0,2. La albúmina está compuesta por 581 residuos de aminoácidos, de los cuales 35 residuos de cisteína constituyen 17 enlaces disulfuro, y hay un grupo sulfhidrilo libre en la posición 34 de la cadena peptídica. La albúmina puede unirse a muchos cationes, aniones y otras moléculas pequeñas.
La albúmina en la sangre desempeña principalmente el papel de mantener la presión osmótica, amortiguar el pH, ser portador y nutrir. En el cultivo de células animales sin suero, la adición de albúmina puede desempeñar un papel de protección y portador fisiológico y mecánico. La albúmina sérica bovina (BSA), también conocida como quinto componente, es una globulina del suero bovino que contiene 583 residuos de aminoácidos, un peso molecular de 66,430 Da y un punto isoeléctrico de 4,7. La albúmina sérica bovina se utiliza ampliamente en experimentos bioquímicos, por ejemplo, como reactivo de bloqueo en transferencias Western.
? Enciclopedia Baidu-Albúmina sérica bovina