¿Qué hace que el ADN en un gel de agarosa sea fluorescente?
El bromuro de etidio es un tinte fluorescente de alta sensibilidad que se utiliza para visualizar el ADN en geles de agarosa y poliacrilamida. El bromuro de etidio se excita mediante un instrumento estándar de transmisión de luz ultravioleta de 302 nm y emite una señal de color rojo anaranjado, que puede ser capturada por un cabezal de imágenes CCD de un sistema de procesamiento de imágenes de gel o película Polaroid.
El bromuro de etidio contiene un grupo plano tricíclico que puede incrustarse entre las bases apiladas del ADN, y su unión al ADN casi no tiene especificidad de secuencia de bases.
Datos ampliados
La forma más sencilla y común de observar el ADN en un gel es teñirlo con el tinte fluorescente bromuro de etidio. El bromuro de etidio es un colorante de ácido nucleico con una molécula plana. A alta fuerza iónica, se inserta una molécula de bromuro de etidio cada 2,5 bases.
En el complejo de bromuro de etidio del ADN, el ADN absorbe radiación ultravioleta de 254 nm y la transfiere al tinte, mientras que las moléculas de tinte combinadas absorben radiación óptica de 302 nm y 399 nm, por lo que la energía absorbida puede reemitirse a 590 nm en la región rojo-naranja del espectro visible.
Por lo tanto, después de teñir las moléculas de ácido nucleico y observar la muestra de electroforesis bajo luz ultravioleta, las bandas de ADN en el medio de gel se pueden detectar de manera muy sensible y conveniente, incluso si cada banda de ADN solo contiene trazas de 0,05 g. del ADN también se puede mostrar claramente. En condiciones de tinción adecuadas, la intensidad de la fluorescencia es directamente proporcional al tamaño o número de fragmentos de ADN.
En una banda de electroforesis que contiene varios fragmentos de ADN, la intensidad de fluorescencia de cada banda disminuye gradualmente desde el fragmento de ADN más grande hasta el fragmento de ADN más pequeño.
Enciclopedia Baidu-Electroforesis en gel
Enciclopedia Baidu-Bromuro de etidio