Principios de la electroforesis en gel de agarosa Introducción a los principios de la electroforesis en gel de agarosa

1. Principio de la electroforesis en gel de agarosa: hay un complejo en el gel de agarosa. Hay resistencia cuando las moléculas del material pasan y la resistencia es grande cuando las macromoléculas aumentan. Por tanto, en la electroforesis en gel, la separación de partículas cargadas depende no sólo de la naturaleza y cantidad de la carga neta, sino también del tamaño de las moléculas, mejorando enormemente la resolución. Sin embargo, debido a que el tamaño de sus poros es demasiado grande en comparación con las proteínas, su efecto de tamiz molecular es insignificante para la mayoría de las proteínas y actualmente se usa ampliamente en la investigación de ácidos nucleicos. La electroforesis en gel de agarosa es un método de electroforesis que utiliza agarosa como medio de soporte. La principal diferencia entre su principio de análisis y otras electroforesis de soporte es que tiene la función dual de "tamiz molecular" y "electroforesis".

2. El ácido nucleico es un electrolito anfótero con un punto isoeléctrico de pH 2-2,5. En un tampón de electroforesis convencional (pH aproximadamente 8,5), las moléculas de ácido nucleico están cargadas negativamente y se mueven hacia el electrodo positivo en un campo eléctrico. Cuando las moléculas de ácido nucleico nadan en gel de agarosa, se producen efectos de carga y efectos de tamiz molecular, pero el efecto de tamiz molecular es el dominante. La movilidad de las moléculas lineales de ADN bicatenario en una determinada concentración de gel de agarosa es inversamente proporcional al logaritmo del peso molecular del ADN. Cuanto más grande es la molécula, mayor es la resistencia y más difícil es moverse dentro de los poros del gel, por lo que la migración es más lenta.