Es correcto describir la prueba de susceptibilidad a fármacos por difusión en disco.
El método K-B de prueba de susceptibilidad a los medicamentos consiste en pegar un trozo de papel empapado con medicamentos antibacterianos en un medio de cultivo en placa de agar recubierto con bacterias. De acuerdo con ciertos requisitos, después de cultivar durante un período de tiempo, mida el tamaño de la zona de inhibición y analice los resultados de acuerdo con los estándares de interpretación relevantes para sacar una conclusión sobre la susceptibilidad a los medicamentos de la cepa probada.
1. Preparación del inóculo de la cepa a analizar
(1) Situación general: De la placa de incubación nocturna, tomar varias colonias individuales de la placa de agar sangre Golovi, Directamente inocular solución salina fisiológica al 4,5% para preparar una suspensión bacteriana. Utilice un turbidímetro para ajustar la turbidez de la suspensión a 0,5 unidades Maxwell para que la suspensión bacteriana contenga E. coli equivalente a ATCC 25922 (1-2) * 6552.
(2) Caso especial: Haemophilus (en este procedimiento solo se mencionan Haemophilus influenzae y Haemophilus parainfluenzae): inocular directamente solución salina normal al 4,5% de la placa HTM que se incubó durante la noche para hacer una suspensión bacteriana líquida. use un turbidímetro para ajustar la turbidez de la suspensión a 0,5 unidades Maxwell, de modo que la suspensión bacteriana contenga E. coli equivalente a ATCC 25922 * 10106.
Placa de inoculación
(1) Después de ajustar la turbidez de la suspensión, sumerja un hisopo de algodón esterilizado en la suspensión y gírelo varias veces sobre el líquido cerca de la pared interior. del tubo de ensayo Retire el exceso de líquido del hisopo, pero hágalo con moderación.
(2) Utilice un bastoncillo de algodón para dibujar líneas en toda la superficie del agar y extiéndalo uniformemente desde la parte superior hasta el fondo de la placa. Repita este proceso dos veces (una vez * tres veces), girando la placa unos 60 grados cada vez para garantizar que la solución bacteriana inoculada se distribuya uniformemente. Finalmente, aplique un círculo alrededor del borde de la placa de agar para evitar que fluya la suspensión bacteriana y extienda la solución bacteriana por cada rincón de toda la placa.
(3) La placa recubierta con solución bacteriana se puede dejar a temperatura ambiente durante un periodo de tiempo (3-5 minutos) para permitir que el agar absorba el exceso de agua en la superficie antes de colocar el papel medicado. pero el tiempo no debe exceder los 15 minutos.
3. Colocar el papel sensible al fármaco de prueba.
Según las diferentes bacterias de prueba, según la agrupación preestablecida, se pega papel con medicamento antibacteriano en la superficie del agar inoculado con bacterias. Cada trozo de papel debe presionarse hacia abajo para asegurar un contacto completo con el agar. superficie. Ya sea que se trate de papel colocado solo o con un equipo de combinación de papel, el papel debe distribuirse uniformemente, la distancia entre los centros de los dos papeles no debe ser inferior a 24 mm y la distancia desde el borde del papel hasta el borde del agar. no sea inferior a 15 mm.
La bandeja MH utilizada en nuestra habitación tiene un diámetro de 90 mm y no puede contener más de 5 hojas de papel. Debido a que algunos fármacos se difunden casi instantáneamente, una vez que el papel toca la superficie del agar, no puede moverse. Si la ubicación no es buena, puedes colocar un trozo de papel en otro lugar del agar.
Incubación
(1) Condiciones generales: Después de colocar el papel, colocar el agar MH boca abajo en la incubadora (35°C) dentro de 15 minutos, e incubar durante 16 a 18 horas (como se muestra a continuación) (Excepto en los casos en los que se requiere un tiempo de incubación prolongado). Las placas de prueba para la detección de Haemophilus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis y Streptococcus mediante el método del disco KB deben incubarse en un ambiente que contenga 5 CO2.
(2) Cultivo extendido: ① Al probar la sensibilidad de oxacilina y cefoxitina a Staphylococcus aureus, el tiempo de cultivo debe alcanzar las 24 horas para cumplir con los requisitos para determinar los resultados. ②Para detectar la sensibilidad de la vancomicina a Staphylococcus aureus y enterococos, el tiempo de incubación debe ser de 24 horas.
5. Medición del diámetro de la zona de inhibición
(1) Condiciones generales: 35°C, después de la incubación de 16 a 18 horas, colocar la placa MH con papel sobre un fondo negro no reflectante Utilice un pie de rey para medir el diámetro de la zona de inhibición (diámetro completo de la zona de inhibición). Utilizando luz reflejada e inspección visual, se pueden leer los milímetros más cercanos a la parte posterior de la placa.
La parte sin crecimiento evidente visible a simple vista es el borde de la zona de inhibición. En general, en el borde de la zona de inhibición aparecen pequeñas colonias que sólo pueden observarse con lupa y pueden ignorarse.
La zona de inhibición en la placa MH es uniforme y circular, y las cepas de prueba aparecen como musgo fusionado en la placa. Si una sola colonia crece escasamente, significa que la concentración de la solución bacteriana preparada durante la inoculación es demasiado fina y es necesario encontrar y volver a analizar la posible causa.
(2) Circunstancias especiales: ① La zona de inhibición de la oxacilina contra Staphylococcus aureus: levante la placa, mire hacia la fuente de luz y use luz transmitida para observar si hay partículas microscópicas en la zona de inhibición alrededor del Papel de oxacilina. Crecimiento de colonias. La resistencia a la oxacilina debe juzgarse si hay un crecimiento identificable.
② La zona de inhibición del linezolid frente a Staphylococcus aureus: utilice luz transmitida y utilice un pie de rey para leer el valor de la zona de inhibición. ③ Zona de inhibición de sulfametoxazol compuesto: hay una cierta cantidad de antagonista del inhibidor del ácido fólico en la placa MH, lo que provocará un ligero crecimiento de las bacterias de prueba. Por lo tanto, al medir el diámetro de la zona de inhibición del compuesto sulfametoxazol, se debe ignorar el crecimiento ligero (aproximadamente 20), y el crecimiento obvio debe considerarse como el límite de la zona de inhibición.