Determinación de ácidos orgánicos en espino
Resumen: Se utilizó cromatografía líquida de alta resolución para analizar varios ácidos orgánicos solubles en agua en el espino. Los resultados fueron estables y confiables y pueden proporcionar una referencia. para el control de calidad del espino.
1. Instrumentos y reactivos
Cromatógrafo líquido de alta resolución, equipado con detector UV, horno de columna y muestreador automático.
El ácido tatárico, el ácido oxálico, el ácido málico, el ácido ascórbico, el ácido cítrico, el ácido succínico y otras sustancias de referencia de ácidos orgánicos son de grado analítico;
El dihidrógeno fosfato de sodio y el ácido fosfórico son de grado analítico;
El agua es agua de alta pureza;
La fase móvil se filtra con una membrana filtrante de 0,45um.
2. Preparación de la sustancia de referencia y la solución problema.
Pesar con precisión cada sustancia de referencia de ácido orgánico (ácido oxálico 12,5 mg, ácido tartárico 25 mg, ácido málico 50 mg, ácido ascórbico 5 mg). , ácido cítrico 250 mg, 5 mg de ácido succínico), agregue 50 ml de agua para disolver y prepare una serie de muestras estándar mixtas utilizando el método de dilución gradual
Pese con precisión aproximadamente 65438 ± 0 g de polvo de muestra de espino (; pasado a través de un tamiz de apertura de 0,45 mm) y colóquelo. Agregue una cantidad adecuada de agua a un vaso de precipitados pequeño, realice una extracción ultrasónica durante 0,5 h, filtre, colóquelo en un matraz volumétrico de 50 ml, pase una cantidad adecuada a través de una membrana de filtro de 0,45 um para preparar una solución de prueba.
3. Condiciones cromatográficas
Columna cromatográfica: ODS2 (4,6mmX250mm, 5um);
Fase móvil: dihidrogenofosfato-tampón fosfato de sodio (pH =2,6). ;);
Caudal: 0,8 ml/min;
Longitud de onda de detección: 210 n m;;
Temperatura de la columna: 25 °C;
Volumen de muestra: 10uL.
4. Optimización de las condiciones experimentales
Los ácidos orgánicos solubles en agua se extraen con agua pura, que tiene una alta eficiencia de extracción y un método simple. El método especificado en la Farmacopea es remojar a temperatura ambiente durante más tiempo.
Este experimento utilizó el método de extracción ultrasónica para examinar la velocidad de extracción a los 20, 30 y 40 minutos respectivamente. Los resultados experimentales muestran que si el tiempo de ultrasonido es demasiado corto, algunas sustancias no se extraen o se extraen de forma incompleta, y si el tiempo de extracción es demasiado largo, no habrá diferencias obvias en los cromatogramas. Por tanto, según el número de picos cromatográficos, área de pico y punto de vista económico, el tiempo de extracción es de 30 minutos.
Para la separación de ácidos orgánicos solubles en agua, se pueden obtener resultados de separación satisfactorios utilizando solo la fase acuosa sin agregar una fase orgánica y, bajo esta condición, la columna cromatográfica no se dañará. Pero, en general, es necesario agregar inhibidores de ácido a la fase móvil para ajustar el valor del pH e inhibir la disociación de los ácidos orgánicos.
Cuando el valor de pH de la fase móvil es bajo, es desfavorable para la fase unida de la columna de gel de sílice y perjudicial para la columna. Sin embargo, cuando el valor de pH de la fase móvil es >: 3, básicamente no hay pico. separación. Por lo tanto, el valor de pH de la fase móvil es 2, 6.
A una longitud de onda de 210 nm, la absorción UV del ácido fórmico y el ácido acético interferirá con la determinación de ácidos orgánicos, mientras que el tampón de fosfato tiene casi no hay absorción en la región UV, por lo tanto, utilice sistemas de tampón de fosfato y dihidrógeno fosfato de sodio para ajustar el valor del pH. Cuando el caudal es grande, la diferencia en el tiempo máximo es pequeña y el efecto de separación es deficiente. En este experimento, se determinó que el caudal era 0,8 ml/min.