¿Cuáles son los métodos para medir la amilasa?
El almidón es hidrolizado por el almidón, cortando los enlaces glicosídicos α-1,4 de la cadena del almidón, y la reacción azul-púrpura al yodo desaparece. La velocidad de desaparición de este color puede indicar el grado de hidrólisis. , y así puede medir la vitalidad de la enzima.
Método de funcionamiento
1. Tome 1 tubo de ensayo, agregue 20 ml de almidón al 2%, mezcle bien y colóquelo en un baño de agua a 30 °C para llevar la temperatura al interior del tubo. a 30°C.
2. Añadir 0,5 ml de amilasa a la solución de almidón a 30°C, mezclar uniformemente, mantener caliente en un baño de agua a 30°C, cronometrar la adición y retirar después de 5
minutos Se añadió 1 ml de la solución de reacción a un tubo de ensayo que contenía 5 ml de solución de yodo diluida. Mezcle bien, observe visualmente el color y repita la medición en ciertos intervalos hasta que el color sea el mismo que el color estándar y registre el tiempo de reacción.
3. En las condiciones anteriores, la cantidad de enzima que cataliza la hidrólisis de 1 ml de almidón soluble al 2% por hora se define como una unidad de actividad enzimática.
Reactivos y equipo
1.
Reactivos
(1) Solución madre de yodo: pesar 11 gramos de yodo y 22 gramos de yodo. yoduro de potasio. Añadir agua para disolver y diluir a 500 ml.
(2) Solución de yodo diluida: Tome 2 ml de solución madre de yodo, agregue 20 gramos de yoduro de potasio y diluya a 500 ml. Este reactivo está listo para usar.
(3) Solución de almidón al 2%: Pese 2 gramos de almidón soluble seco, agregue 5 ml de agua destilada, revuelva para mezclar y luego vierta lentamente en 70 ml de agua destilada hervida. Continúe hirviendo durante 2 minutos, enfríe a temperatura ambiente y agregue el tampón de ácido cítrico y fosfato ácido de disodio (pH es 6)
(4) Tampón de ácido cítrico: pese el fosfato ácido de disodio (Na2HPO4?12H2O) 45,23 gramos, 8,068 gramos de ácido cítrico (C6H8O7?H2O), agregar agua para disolver y diluir a 1000 ml.
(5) Solución colorimétrica estándar: Pesar 25 gramos de cloruro de cobalto (CoCL2?6H2O) y 3,34 gramos de dicromato de potasio y disolverlos en 100 ml de HCl 0,01 N
Cinco. veces se utilizó la dilución como estándar.
(6) Muestra: alfa-amilasa bacteriana