Cómo analizar el patrón de electroforesis en gel de productos de amplificación por PCR

Toma fotografías a través del sistema de imágenes en gel y presta atención a ajustar el contraste. Si está escribiendo un informe, puede marcar el peso molecular y el brillo de cada banda del marcador; consulte las instrucciones para obtener más detalles;

Luego explique que el fragmento amplificado y el fragmento objetivo son del mismo tamaño. ambos son xx; si hay bandas mixtas en la imagen, puede analizarlo, por ejemplo, puede ser una situación de cebador-dímero, de modo que pueda ajustar la temperatura de recocido o la cantidad de cada componente en el siguiente experimento.

Información ampliada:

Voltaje de alimentación

A bajo voltaje, la tasa de migración de fragmentos lineales de ADN es proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, a medida que aumenta la intensidad del campo eléctrico, la movilidad de los fragmentos de ADN con diferentes pesos moleculares aumentará en diferentes amplitudes.

Cuanto más grande sea el fragmento, mayor será el aumento de movilidad provocado por el aumento de la intensidad del campo. Por lo tanto, a medida que aumente el voltaje, el rango de separación efectivo del gel de agarosa disminuirá. Para separar eficazmente fragmentos de ADN de más de 2 kb, el voltaje aplicado no debe exceder los 5 V/cm.

Presencia de colorantes intercalantes

El colorante fluorescente bromuro de etidio se utiliza para detectar ADN en geles de agarosa. El colorante se intercalará entre los pares de bases apiladas y alargará las líneas circulares. ADN, haciéndolo más rígido y reduciendo la movilidad lineal del ADN en un 15%.

La fuerza iónica afecta

La composición del tampón de electroforesis y su fuerza iónica afectan la movilidad electroforética del ADN. Cuando no hay iones (como al usar por error agua destilada para preparar el gel), la conductividad es mínima y el ADN apenas se mueve. En un tampón con alta fuerza iónica (como al agregar por error un tampón de electroforesis 10X), la conductividad es muy alta y. Se produce una producción obvia. El calor puede provocar la fusión del gel o la desnaturalización del ADN en casos graves.

Enciclopedia Baidu-Electroforesis en gel