¿Cómo hacer una placa de gel de electroforesis?
Agregue agua y calor para derretir, instale un peine de dientes, agregue reactivo cromogénico (o tinción por electroforesis completa) a la temperatura adecuada y vierta el tablero de pegamento.
El siguiente es el funcionamiento de la electroforesis en gel de agarosa:
1. Seleccione un tanque de electroforesis horizontal adecuado y ajuste la superficie del tanque de electroforesis para que quede horizontal. Verifique el cableado entre la fuente de alimentación regulada y los electrodos positivo y negativo;
2. Seleccione un peine de detección con una apertura adecuada y colóquelo verticalmente en un extremo del molde de electroforesis para que la distancia entre la parte inferior de el peine de manchado y el fondo del molde de electroforesis son de 1,0 mm;;
3. Preparar agarosa de la concentración correspondiente según el ADN a separar y calentarla en un baño de agua a 100 °C hasta obtener la agarosa. se derrite uniformemente;
4. Utilice una pipeta para tomar una pequeña cantidad. La solución de gel de agarosa sella la periferia del molde de gel de electroforesis para evitar la penetración de la placa de gel de agarosa cuando se riega. Cuando el gel de agarosa se enfríe a aproximadamente 50 °C, agregue 6 µl de colorante de ácido nucleico, agite bien y vierta suavemente en el molde del gel de electroforesis. El espesor del gel de agarosa es de 3 a 5 mm. Evite las burbujas de aire al verter el gel. Si hay burbujas de aire, chúpalas con cuidado con una pajita.
5 Después de que el gel de agarosa se solidifique, colóquelo a temperatura ambiente durante 20 minutos. Retire con cuidado el peine de muestra y los deflectores en ambos extremos del molde del gel de electroforesis para mantener intactos los orificios de la muestra.
6. Coloque el gel de electroforesis Coloque el molde de gel en el tanque de electroforesis y agregue el tampón de electroforesis de modo que el nivel de líquido del tampón de electroforesis sea de 1 a 2 mm más alto que la superficie del gel de agarosa. Si hay burbujas de aire en el orificio de muestreo, sáquelas con cuidado con una pipeta para evitar afectar el muestreo.
7 Mezcle 10 µl de muestra de ADN con 2 µl de tampón indicador de azul de bromofenol; El tampón de carga no solo puede aumentar la densidad de la muestra, permitiendo que la muestra se hunda uniformemente en el pocillo de la muestra, sino también colorear la muestra, lo que facilita cargar la muestra, estimar el tiempo de electroforesis y determinar la posición de la electroforesis.
8 Utilice una micropipeta para agregar cuidadosamente la muestra en el orificio de muestreo y registre el orden de muestreo de las muestras.
9. Cubra el tanque de electroforesis, encienda el interruptor de encendido. y establezca el máximo El voltaje no excede los 5 V/cm (electroforesis de voltaje constante de 100 ~ 150 V), lo que permite que el ADN se mueva del electrodo negativo al electrodo positivo;
El tiempo de electroforesis de 10 varía según el requisitos específicos del experimento. La electroforesis generalmente dura de 1 a 3 horas. Después de la electroforesis, apague la alimentación, use guantes de plástico desechables para sacar el gel, drene todo el tampón de electroforesis tanto como sea posible y observe bajo una lámpara ultravioleta transmitida con una longitud de onda de 254 nm.