¿Cómo operar y determinar los resultados de la prueba de inmunodifusión en gel de agar (AGID)?

Los procedimientos específicos de operación y determinación de resultados de la prueba de difusión en agar son los siguientes:

(1) Preparación del material

①Solución de timerosal, 0,01 mol/L de PBS con líquido de pH 7,2.

② Realizar una placa de agar.

③Antígeno de inmunodifusión en gel de agar, suero estándar negativo y positivo de influenza aviar.

(2) Método de operación

①Perforar agujeros. Haga un grupo de 7 orificios en forma de flor de ciruelo en la placa de agar preparada (1 orificio en el medio, 6 orificios alrededor. El diámetro de los orificios es de aproximadamente 5 mm y el espacio entre los orificios es de 2 a 5 mm). 8 para inclinar el agar en el orificio hacia arriba. Inserte el borde derecho y extraiga suavemente el agar hacia la izquierda sin dañar el borde ni hacer que la capa de agar se separe del fondo del plato.

②Contraportada. Hornee ligeramente el fondo de la placa con una lámpara de alcohol hasta que el agar esté a punto de derretirse y selle el fondo del orificio para evitar fugas laterales.

③Agregar muestra. Utilice una micropipeta o una jeringa de 0,25 ml con una aguja del número 6 al 7 para extraer la suspensión de antígeno y dejarla caer en el orificio del medio (n° 7 en la imagen de la página siguiente. El suero positivo estándar se agrega al periférico). ① y ④ orificios respectivamente. El suero de prueba se agrega a los otros cuatro pocillos periféricos en orden de número (pocillos ②, ③, ⑤ y ⑥ en la imagen de la página siguiente). Cada orificio debe llenarse hasta el punto en que no se desborde. Se debe reemplazar un gotero cada vez que se agrega una muestra.

④Función. Después de agregar la muestra, déjela reposar de 5 a 10 minutos, luego invierta suavemente la placa y colóquela en una caja humidificada, y colóquela en una incubadora a 37°C. Observe y registre los resultados a las 24 horas, 48 ​​horas. y 72 horas.

(3) Juicio de resultados

①Método de juicio. Coloque la placa de agar bajo una lámpara fluorescente o una luz lateral intensa y obsérvela. Si aparece una línea de precipitación blanca y clara entre el suero positivo estándar (pocillos ① y ④ en la imagen) y el pocillo de antígeno, la prueba está establecida.

②Estándar de juicio a. Si aparece una línea de precipitación clara y densa entre el orificio del suero analizado (No. 2 en la imagen) y el orificio central del antígeno, y la línea precipita entre el antígeno y el suero positivo estándar. Si los extremos de las líneas coinciden, el suero analizado se considera positivo.

b Aunque no hay una línea de precipitación entre el orificio de suero probado (N° 3 en la imagen) y el orificio central, la línea de precipitación del orificio de suero positivo estándar (N° 4 en la imagen) tiene un extremo hacia Si el interior del orificio del suero analizado está curvado, la muestra analizada en este orificio se considerará positiva débil (cualquier positivo débil debe repetirse la prueba, y si todavía es débilmente positivo, se considerará como positivo).

c. Si no hay una línea de precipitación entre el orificio del suero analizado (n.º 5 en la figura) y el orificio central, y la línea de precipitación del suero positiva estándar es directa al orificio del suero analizado, se realiza la prueba. el suero se considera positivo es negativo.

d. La línea de sedimentación entre el orificio del suero analizado (No. 6 en la figura) y el orificio central del antígeno es espesa y turbia, o la línea de precipitación entre el suero positivo estándar y el orificio del antígeno se cruza y se extiende recto y la prueba es El orificio del suero muestra una reacción no específica y debe repetirse. Si aún ocurre una reacción no específica, se considerará negativa.