El principio de detección de ADN mediante electroforesis en gel de agarosa
El principio de la electroforesis en gel de agarosa de fragmentos de ADN es básicamente el mismo que el de las proteínas. Las moléculas de ADN están cargadas negativamente en soluciones con un pH superior a su punto isoeléctrico y se mueven hacia el electrodo positivo en un campo eléctrico. Las moléculas de ADN nadan a través del medio en un campo eléctrico. Además del efecto de carga, el medio gel también tiene un efecto de tamiz molecular, que está relacionado con el tamaño y el concepto de las moléculas.
Para las moléculas de ADN lineales, la movilidad en un campo eléctrico es inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. Las moléculas de ácido nucleico son moléculas de disociación anfipática. El pH 3,5 es la disociación del grupo amino en la base. Solo uno de los tres grupos fosfato se disocia, por lo que la molécula está cargada positivamente y nada hacia el electrodo negativo en el campo eléctrico. Pero a un pH de 8,0 a 8,3, las bases son casi inseparables y los grupos fosfato están libres, por lo que las moléculas de ácido nucleico están cargadas negativamente y nadan hacia el electrodo positivo en el campo eléctrico.
Introducción a la agarosa y electroforesis;
La agarosa es un polímero lineal cuya estructura básica es β-D-galactosa unida 1,3 y 1,4 - Cadenas largas de 3, unidas. 6-endoéter-L-galactosa. La pectina de agar es una mezcla heterogénea de muchas moléculas pequeñas.
La agarosa generalmente se calienta por encima de los 90°C para disolverla en agua. Cuando la temperatura baja a 35-40°C, forma un buen gel semisólido, que es su principal característica y base. diversos usos. El rendimiento del gel de agarosa suele expresarse en términos de fuerza del gel. Cuanto mayor sea la resistencia, mejor será el rendimiento del gel. La electroforesis es el fenómeno en el que partículas cargadas se mueven hacia electrodos opuestos bajo la influencia de un campo eléctrico. La tecnología que utiliza diferentes velocidades de movimiento en un campo eléctrico para separar partículas cargadas se llama electroforesis.