Precauciones sobre electroforesis en gel de agarosa
Las notas son las siguientes:
1. Sistema tampón: Cuando no hay iones, la conductividad es mínima y el ADN no migra, o lo hace extremadamente lentamente, en un tampón con Alta fuerza iónica, la conductividad es muy alta y genera calor, lo que puede provocar la desnaturalización del ADN, por lo que se debe prestar atención a si el tampón se utiliza correctamente. Durante la electroforesis de alto voltaje a largo plazo, es aconsejable actualizar frecuentemente el tampón o hacer circular el tampón entre los dos tanques.
2. Agarosa: La agarosa de diferentes fabricantes y números de lote tiene diferentes contenidos de impurezas, lo que afecta la migración del ADN y la intensidad del fondo de fluorescencia, y debe usarse de forma selectiva.
3. Preparación del gel: el tampón agregado al gel debe ser consistente con el del tanque de electroforesis. El gel disuelto debe verterse en la placa a tiempo para evitar la solidificación antes de verter. El gel vertido en la placa debe evitar burbujas, que pueden afectar los resultados de la electroforesis.
4. Cantidad de muestra agregada: En circunstancias normales, un peine de 0,5 cm de ancho puede agregar 0,5 μg de ADN. La cantidad de muestra agregada depende del tamaño del pocillo de la muestra y del número y tamaño de los fragmentos. en el ADN se determina que una cantidad excesiva sobrecargará bien la muestra, lo que provocará colas y dispersión. Este fenómeno es más obvio para el ADN más grande.
5. Los cambios en el sistema de electroforesis afectarán la migración del ADN y es necesario agregar materiales de referencia estándar de ADN para juzgar.
6. La concentración de sal en las muestras de ADN afectará a la movilidad del ADN. Las muestras de control paralelas deben utilizar las mismas condiciones de tampón para eliminar este efecto.
7. La movilidad del ADN depende de la concentración del gel de agarosa, de la forma y del tamaño de las moléculas que migran. Es posible resolver una amplia gama de moléculas de ADN utilizando geles de diferentes concentraciones, y se pueden preparar geles de agarosa para determinar la concentración del gel en función de la variedad de moléculas de ADN. Se debe utilizar electroforesis en gel de poliacrilamida para la electroforesis de ADN de fragmentos pequeños para mejorar la resolución.