Diagnóstico microbiológico de los bacilos de la difteria

Los pacientes con sospecha clínica de difteria no tienen que esperar los resultados de las pruebas y deben recibir tratamiento con antitoxinas y antibióticos de inmediato. Sin embargo, el primer paciente en el período epidémico de difteria debe ser confirmado mediante un examen microbiológico.

Microscopía de tinción directa

Utilice un hisopo de algodón para recoger el exudado del borde de la pseudomembrana, haga un frotis y utilice la tinción de Neisser o la tinción de Metileno Lan para comprobar si hay metástasis. bajo el microscopio. Partículas de Corynebacterium. Se puede hacer un diagnóstico preliminar basado en los síntomas clínicos. La confirmación debe realizarse mediante cultivo bacteriano y pruebas de virulencia.

Método de cultivo de hisopo de suero coagulado

Coloque el hisopo de algodón teñido con suero de caballo o vaca en un tubo de ensayo esterilizado y esterilícelo con 8 a 10 libras de vapor durante 20 a 30 minutos y coagular el suero y tomar la muestra faríngea del paciente del hisopo de suero coagulado, incubarla a 37 ° C durante 8 a 10 horas y luego realizar una baciloscopia directa. Este método se puede utilizar para un diagnóstico de cultivo rápido durante una gran cantidad de exámenes.

Inspección de cultivo

Inocular el material de prueba de algodón en medio inclinado de huevo o en medio inclinado de coagulación de suero de Loeffer y en medio de placa de telurito de potasio, y colocarlo a 37 ℃ de cultivo, y cuando Las colonias grises típicas crecen en la placa inclinada o inclinada, las recogen y las transfieren a huevos o placas inclinadas de suero para su aislamiento y cultivo para una mayor tinción morfológica o identificación de pruebas de virulencia.

Prueba de toxicidad

1. Prueba con cobayas: Tome 2 cobayas que pesen 250 g. A uno de ellos se le inyectó por vía intraperitoneal 250-500 unidades de antitoxina diftérica 12 horas antes de la prueba. Luego compara. Luego, se inyectaron por vía subcutánea 2 ml de solución de cultivo durante 48 horas. Si el conejillo de indias al que se le había inyectado la antitoxina murió entre 2 y 4 días y el conejillo de indias de control sobrevivió, se probaría que la cepa analizada era un bacilo de difteria virulento.

2. Prueba in vitro

① Prueba independiente en placa de agar, también conocida como prueba de placa E, se pega una tira de papel de filtro estéril empapada con antitoxina diftérica en una placa de agar que contiene un 20% de suero de caballo y luego se sigue la vertical. dirección de la tira de papel de filtro. Inocular las bacterias a analizar y también inocular cepas conocidas productoras de toxinas y cepas no productoras de toxinas como controles. Después de 48 horas de incubación a 37°C, si la cepa a analizar produce exotoxinas diftéricas, aparecerá una línea de precipitación blanca fuera de la interfaz entre la tira de papel de filtro y el césped bacteriano rayado.

② Inmunoelectroforesis a contracorriente: coloque la antitoxina diftérica conocida y la solución de cultivo bacteriano a analizar en dos pocillos de una placa de agar y energícelos durante 1 a 2 horas. Si aparece una línea de precipitación blanca entre los dos pocillos, indica que las bacterias que se van a analizar pueden producir toxina diftérica y, a menudo, se utiliza para la detección de muestras de gran tamaño.

③Prueba de aglutinación sinérgica de SPA: preadsorba la antitoxina diftérica (IgG) a la proteína A de Staphylococcus aureus (SPA) y luego agregue el sobrenadante del cultivo de las bacterias que se van a analizar. Si la toxina diftérica está presente, puede unirse a SPA-IgG y provocar una reacción de aglutinación visible. Este método es más sencillo y rápido.