¿Por qué elegir la electroforesis de zonas de proteínas séricas para detectar la proteína M?

1. Conocimientos básicos de la proteína M

La proteína M es una inmunoglobulina anormal producida cuando las células plasmáticas o los linfocitos B proliferan en grandes cantidades. Su composición de aminoácidos y secuencia de disposición son muy uniformes, y su conformación espacial y características electroforéticas también son exactamente las mismas. Esencialmente una inmunoglobulina o su fragmento (cadena ligera, cadena pesada, etc.). Debido a que es producida por un monoclonal, a menudo aparece en la sangre o en la sangre de pacientes con mieloma múltiple, macroglobulinemia y linfoma maligno. , por eso se llama proteína M. La mayoría de estas proteínas M no tienen actividad de anticuerpos, por lo que también se denominan paraproteínas.

La albuminemia M se puede dividir en categorías malignas y no especificadas. La proteinemia M maligna es más común en el mieloma múltiple (incluida la enfermedad de las cadenas ligeras), la macroglobulinemia, la enfermedad de las cadenas pesadas, la enfermedad de la proteína 7SIg M (enfermedad de Solomen-Konkel), la enfermedad semimolecular y la proteinopatía del mieloma incompleto (defecto del gen C terminal). La gammapatía monoclonal de significado desconocido (M GUS) se puede dividir en dos tipos, uno se acompaña de otros tumores malignos (como el linfoma maligno) y el otro se llama MG US benigno.

Los métodos de detección de proteína M incluyen principalmente electroforesis en agar o agarosa, inmunoelectroforesis, electroforesis por inmunofijación e inmunoelectroforesis selectiva.

II.Identificación de la proteína M

1. Detección e identificación de la proteína M en pacientes con mieloma múltiple y macroglobulinemia

(1) Análisis cuantitativo del suero total proteína. El 90% de los pacientes tiene un contenido elevado de proteínas séricas totales (70% de los pacientes > 100 g/L) y alrededor del 10% de los pacientes tienen niveles normales o incluso bajos (como en la enfermedad de cadenas ligeras).

(2) Electroforesis en membrana de acetato de proteínas séricas o agarosa. La proteína M tiene un pico típico de cepa única (también llamado banda M) en la electroforesis, que se caracteriza por una banda estrecha y gruesa y un pico agudo al escanear. La relación de aspecto del área γ es ≥2 y la relación de aspecto del área β es ≥1. Debido a la diferencia de Ig, esta banda M puede aparecer en cualquier región desde γ hasta α 2. Otra característica de la proliferación de la proteína M son otras zonas.

El banding se reduce significativamente y la imagen mostrada es más sencilla. A veces, la proteína M sanguínea de algunos pacientes no es alta, lo que está determinado por la capacidad de secreción de Ig de las células mutantes. El pico M del suero de este paciente no es evidente durante la electroforesis y otras proteínas lo cubren fácilmente. El suero debe diluirse y detectarse mediante otros métodos sensibles, como la electroforesis por inmunofijación.

(3) Cuantificación de inmunoglobulinas séricas. Generalmente, el contenido de Ig perteneciente a la proteína M aumenta significativamente y los demás niveles de Ig son normales o disminuyen significativamente.

(4) Inmunoelectroforesis.

①Resultados normales de la inmunoelectroforesis en suero humano: se pueden distinguir más de 20 componentes proteicos. En el extremo del ánodo hay una gruesa línea de precipitación en forma de barco, que es albúmina. Por lo general, el componente Ig está cerca del extremo del cátodo, con la Ig M más cercana al orificio de muestreo, seguida por la IgA y la IgG, formando una línea de precipitación suave y continua.

②Mieloma múltiple: El mieloma múltiple se puede dividir en cinco tipos: IgG, IgA, IgM, IgI) e IgE5. IgG e IgA se dividen en subclases, y todas las cadenas ligeras de Ig se dividen en dos tipos. Por lo tanto, la posición de la línea de precipitación deformada en inmunoelectroforesis varía con la banda electroforética de cada molécula y puede aparecer desde la región lenta γ ~ β 2. La IgG 1 aparece principalmente en la región γ lenta y la IgG 4 aparece en la región β ~ α.

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Área. La proteína M forma un arco de precipitación denso con el suero anticadenas pesadas y el suero anticadenas ligeras correspondientes, y el rango de migración es muy limitado. Debido al alto contenido de Ig en el suero de este paciente, puede haber un exceso absoluto de antígeno sin línea de precipitación durante el proceso de difusión inmune. En este momento, es necesario diluir el suero y rehacerlo y, a menudo, se pueden obtener resultados satisfactorios. ③ Macroglobulinemia: por proliferación de moléculas IgM. En la inmunoelectroforesis suelen aparecer las siguientes características: En primer lugar, la línea de precipitación está evidentemente deformada. Generalmente, la IgM forma líneas de precipitación cortas y la deformación no es fácilmente visible. Cuando la IgM aparece en grandes cantidades, toda la línea de precipitación de IgM se deforma. En segundo lugar, hay precipitados grumosos alrededor de los pocillos de antígeno y a lo largo del eje longitudinal de la electroforesis. En tercer lugar, no hay migración de componentes de IgM durante la electroforesis. Esto se debe principalmente a la polimerización de las moléculas de IgM y a la inmovilidad de la electroforesis.

(5) Detección de proteína en orina.

① Detección cualitativa: mediante método de precipitación térmica y método del ácido sulfosalicílico.

②Inmunoelectroforesis: Después de concentrar la orina, realice una inmunoelectroforesis. La mayoría de los pacientes con mieloma múltiple y enfermedad de cadenas ligeras tienen sólo una línea de depósitos densa, arqueada y curva.

Con este método se puede detectar entre el 60% y el 80% de los pacientes con mieloma y casi todos los pacientes con enfermedades de cadenas ligeras.

③Inmunoelectroforesis reticulada con albúmina-glutaraldehído de cadena ligera: el mieloma múltiple, la macroglobulinemia de Waldenstrom y la enfermedad de cadenas ligeras pueden ser positivos y las personas normales pueden ser negativos. La tasa de detección de proteína periciclo en orina mediante este método es del 100% y la tasa de falsos positivos es del 4%. Puede producirse un resultado positivo cuando la orina contiene 200 μg/ml.

2. Detección e identificación de la proteína M de la enfermedad de cadena pesada

Al igual que el mieloma múltiple, las moléculas de cadena pesada son más pequeñas que las moléculas de Ig en la inmunoelectroforesis, por lo que migran más rápido y la posición electroforética es más cercana. el lado del ánodo (β ~ α). Sin embargo, las enfermedades de cadenas pesadas generalmente requieren inmunoelectroforesis para confirmar el diagnóstico.

3.7 Detección e identificación de la proteína M en la enfermedad de sigmoide

Generalmente, la IgM es un pentámero con un coeficiente de sedimentación de 19S, mientras que la IgM de pacientes con 7S IgM es un monómero con un coeficiente de sedimentación de 7S. Hay dos métodos para probar 7S Ig M: uno es determinar la cantidad total de Ig M, pasar 1 ~ 2 ml de suero a través de la columna Sepharose 6B y luego usar un medidor de área para medir el porcentaje de 7S Ig M en el Ig M total según el patrón de pico de elución, convertido con la cantidad total de Ig M, se obtiene el valor absoluto de 7S IgM. Otro método es la electroforesis selectiva de fitohemaglutinina (PHA). El principio de este método es que la IgM pentamérica puede unirse al PHA para formar un precipitado, mientras que la IgM monomérica no se une al PHA. Después de agregar PHA al gel de agar y realizar la electroforesis, la Ig M pentamérica es retenida por PHA, mientras que la Ig M 7S continúa nadando hacia el ánodo y puede reaccionar con el antisuero Ig M agregado posteriormente al tanque de anticuerpos para formar una precipitación única. arco.