¿Alguien sabe qué es la levadura bihíbrida?

El sistema de dos híbridos de levadura se realiza en la levadura del organismo modelo eucariota. Para estudiar las interacciones entre proteínas en células vivas, también se pueden detectar con sensibilidad efectos débiles y transitorios sobre las proteínas a través de los productos de expresión de genes informadores. El estudio de las relaciones entre proteínas es una técnica muy sensible.

Principio:

El establecimiento del sistema de dos híbridos de levadura se basa en la comprensión del proceso de regulación del inicio de la transcripción en eucariotas. La transcripción de genes de iniciación celular requiere la participación de activadores transtranscripcionales. Los activadores transtranscripcionales, como el factor de transcripción de levadura GAL4, tienen una estructura modular y a menudo constan de dos o más dominios estructuralmente separables y funcionalmente independientes, incluido un dominio de unión al ADN (DNA-BD) y un dominio de activación transcripcional (DNA-AD). ). Cuando los dos dominios de unión se separan, siguen siendo funcionales pero no pueden activar la transcripción. Sólo cuando los dos dominios separados están espacialmente cerca uno del otro se puede reproducir la actividad completa del factor de transcripción GAL4 y se puede activar el promotor aguas abajo de la secuencia activadora aguas arriba (UAS) para transcribir los genes aguas abajo de este promotor.

Según esta característica, el gen que codifica DNA-BD y el gen de la conocida proteína cebo se construyeron en el mismo vector de expresión, y su proteína de fusión BD-bait se expresó en levadura. Se construyeron genes y bibliotecas de ADNc que codifican AD en el vector de expresión de la biblioteca AD. Al mismo tiempo, los dos vectores anteriores se transforman en levadura transformada. El genoma de las células de levadura transformadas no puede producir GAL4 ni sintetizar LEU, TRP, HIS y ADE, por lo que la levadura no puede crecer normalmente en medios que carecen de estos nutrientes. Cuando las proteínas de fusión expresadas por los dos vectores anteriores pueden interactuar, los factores de acción trans reconstruidos funcionalmente pueden activar los genes indicadores HIS, ADE, LACZ y MEL1 en el genoma de la levadura, eliminando así colonias positivas mediante complementación funcional y reacciones de color. El vector de la biblioteca AD en la cepa de levadura positiva se extrae y se aísla para que los genes de la biblioteca insertados en el vector puedan secuenciarse y analizarse.