Cultivo de tejidos vegetales Quiero hacer un cultivo de tejidos vegetales en casa como regalo de cumpleaños. ¿Quieres conocer el método general? Es decir, existen pocos tipos de medicamentos, el funcionamiento es relativamente sencillo y requiere cierto grado de contenido técnico.
El cultivo de tejidos de plantas no puede separarse de las condiciones y elementos más básicos. No era imposible hacer un uso racional de algunas de las herramientas más simples de la época.
1. Los elementos más necesarios
1. Es mejor tener una olla a presión doméstica más grande para contener más cosas. Se utiliza para desinfección de medios de cultivo, agua esterilizada, etc.
2. Una caja de inoculación (caja esterilizada) debe ser casera, utilizando unas tablas de madera, un trozo de vidrio y dos pies de tela. Para inoculación y transferencia.
3. 1 balanza medicinal, preferiblemente de 500g para pesar, también se pueden utilizar balanzas más pequeñas para pesar agar, azúcar y otros elementos.
4. Compra ollas de acero inoxidable o de aluminio (de las que se utilizan para sopas y fideos). Se utiliza para cocinar medio de cultivo.
5. La cuchara que se utiliza para preparar el medio de cultivo se utiliza para cocinar y preparar el medio de cultivo.
6. Varios frascos de cultivo,
7. Algo de algodón, gasa e hilo de seda utilizados para fabricar tampones, cabe destacar que se debe hacer el algodón. de algodón ordinario Utilice algodón como tampón para ropa acolchada de algodón. No utilice algodón absorbente utilizado en hospitales, ya que esto puede provocar fácilmente la contaminación a través del tampón.
8. Un poco de papel kraft y gomas para envolver y atar cabezas de botellas.
9. 1 lámpara de alcohol, 1 bisturí, varias cuchillas, 2 pinzas, 1 probeta de 10ml y 100ml, 1 pipeta de 2ml y un poco de algodón.
2. Cómo solucionar el problema del agua destilada y los medicamentos básicos
El agua utilizada en el medio de cultivo siempre se siente muy importante en la mente de la gente común, pero de hecho, el la preocupación es innecesaria. Se utilizó agua hervida fría y agua limpia de río y el efecto de cultivo no se vio afectado. El agua purificada que se vende en el mercado es ideal para medios de cultivo generales. Simplemente compre los siguientes que son los más utilizados, necesarios y utilizados en mayores cantidades.
1. Medio MS de elemento masivo (el medio MS generalmente es suficiente para el cultivo doméstico o en sala de cultivo de tejidos de bolsillo). ***5 tipos. También puede adquirir medio de cultivo MS disponible en el mercado
(1), nitrato de amonio
(2), nitrato de potasio
(3), cloruro de calcio p>
(4), nitrato de magnesio
(5), dihidrogenofosfato de potasio
2, alcohol
3, papel de prueba de precisión ( PH 5,4 -7,0))
4. Lejía o lejía
5. Agar
6.
8. Permanganato de potasio (se puede adquirir en el hospital o en tienda de medicina tradicional china)
9. La dosificación de oligoelementos, sales de hierro, vitaminas, fármacos hormonales, etc. pequeñito. Por ejemplo, algunas hormonas, vitaminas, inyecciones y tabletas tienen contenidos relativamente precisos y pueden prepararse en proporción a sus propias necesidades.
La exploración y sugerencia del cultivo de tejidos en un entorno doméstico por parte de aficionados, las técnicas de cultivo de tejidos vegetales, especialmente las técnicas de propagación rápida, no son algo que sólo puedan realizar profesionales y laboratorios profesionales. Como aficionado con un gran interés en las suculentas y el cultivo de tejidos, también puede aprovechar al máximo las condiciones del hogar y preparar usted mismo las plántulas de probeta. En el proceso de cultivo de suculentas, hemos descubierto algunas variedades hortícolas relativamente raras, como variedades del zodíaco como Wanxiang, Jade Fan, estrella de la longevidad, garra de águila alta o plantas tubérculos como Cailan y Horgos petunia. Incluso planetas, peonías de roca. etc., los coeficientes de reproducción convencionales de estas plantas son muy bajos. Al utilizarlas para resolver el problema del cultivo de tejidos para la reproducción, se puede obtener un número considerable de plántulas de probeta. Las plantas cuyas semillas son difíciles de germinar, como Fantasy Sky, también se pueden sembrar asépticamente con la ayuda de un cultivo de tejidos. El proceso de cultivo de tejidos no sólo permite a las personas tener una comprensión más profunda de las plantas cultivadas, sino que también tiene una importancia considerable para el cultivo convencional. Muchos expertos en cultivo de tejidos no se especializaron inicialmente en el cultivo de tejidos, pero han logrado resultados brillantes gracias a su interés y espíritu de exploración.
La clave es que los aficionados tienen un gran interés, una observación extraordinaria y una capacidad de operación meticulosa, lo que puede compensar las deficiencias de los no profesionales y pueden aprovechar al máximo los diversos recursos disponibles en la vida diaria, lo que es suficiente para que los aficionados operen en el Ambiente domiciliario. Cultivo completo de tejidos. Al mismo tiempo, esto no sólo satisface los propios intereses y aficiones, sino que también puede aportar ciertos beneficios económicos e incluso inventos innovadores.
1. Cómo solucionar el problema del espacio y equipamiento básico:
Para realizar un cultivo de tejidos es imposible realizarlo sin un determinado equipamiento. Los equipos de cultivo de tejidos en los laboratorios formales son caros y no aptos para el consumo doméstico. Sería fantástico si existiera una manera de conseguir equipos experimentales baratos. Si no tiene equipo de laboratorio, intente fabricar usted mismo algunos equipos sencillos.
1. Equipo principal: funcionamiento aséptico de la caja de inoculación y la olla a presión:
Caja de inoculación: la operación en cuestión del cultivo de tejidos vegetales debe realizarse en un entorno estéril relativamente cerrado. De esta manera, primero debemos crear un ambiente cerrado. Podemos utilizar algunos materiales baratos, como tablas de madera, tablas de plástico, plexiglás y marcos de aleación de aluminio, y pegarlos para formar una pequeña caja de inoculación. Para parámetros específicos, puede encontrar el libro "Cultivo de hongos comestibles" y simplemente seguir el ejemplo del cultivo de hongos en una caja de inoculación. Cabe señalar que la caja de inoculación de cultivo de tejidos tiene altos requisitos de hermeticidad. Trate de evitar madera podrida y materiales oxidados. Se colocan dos luces en la parte superior de la caja: una lámpara ultravioleta de 20 vatios y una lámpara fluorescente de 20 vatios. Intente utilizar material de vidrio alrededor de la caja porque es más fácil de observar. A veces, la caja de inoculación también se puede tomar prestada de una incubadora. El material de vidrio alrededor de la caja es más conveniente para la observación y el cultivo.
Esterilizador de alta presión: utilizado principalmente para esterilizar medios de cultivo y otros materiales. Los autoclaves médicos se utilizan habitualmente en los laboratorios, pero en casa conviene aprovechar al máximo la olla a presión de la cocina. Aunque la presión de la olla a presión es menor que la del esterilizador, aún se pueden conseguir mejores resultados prolongando adecuadamente la esterilización. tiempo. Por ejemplo: 40 minutos de esterilización del cultivo básicamente pueden lograr el efecto de esterilización (el gabinete de esterilización dura 20 minutos y el agua esterilizada adopta el método de esterilización intermitente; primero presurícela con una olla a presión durante 40 minutos, déjela durante 24 horas y luego presurícela); durante otros 20 minutos. Se puede lograr el efecto.
2. Lugar:
Esto es muy fácil para las personas. El requisito general es que el lugar donde se realizan las operaciones de cultivo de tejidos esté lo más libre de polvo posible y reduzca el flujo de aire. Lo mejor es tener una cierta cantidad de exposición al sol. Por ejemplo, se puede utilizar un estudio o una sala de escritura para procedimientos asépticos.
Se puede alquilar la cocina para una preparación media, pero los utensilios utilizados deben estar separados de la cocina. En términos generales, con la excepción de algunas hormonas y esterilizantes, casi todas las sustancias químicas presentes en los cultivos de tejidos son inofensivas para los seres humanos. Las sustancias tóxicas deben almacenarse con cuidado para evitar peligros.
3. Equipo auxiliar:
Se refiere principalmente al frigorífico, que se utiliza para almacenar productos químicos y medios de cultivo. Para la balanza se puede utilizar una balanza de paleta con una sensibilidad de 100 gramos, o incluso una balanza de medicina tradicional china. El bastidor de cultivo es relativamente simple. Una incubadora de vidrio y aleación de aluminio puede cumplir con los requisitos. Si no hay suficiente luz solar, use una lámpara fluorescente para complementar la luz.
4. Reactivos químicos:
Los reactivos químicos son indispensables porque el núcleo del cultivo de tejidos son los componentes del medio de cultivo, no simples operaciones asépticas. Es necesario adquirir grandes cantidades de reactivos químicos, como macroelementos (nitrato de amonio, nitrato de potasio, dihidrógenofosfato de potasio, sulfato de magnesio, cloruro de calcio, etc.), permanganato de potasio, formaldehído, alcohol, azúcar, agar, etc. No es necesario comprar oligoelementos ni complejos orgánicos porque se utilizan en pequeñas cantidades y pueden sustituirse por zumo de verduras o de patatas. Las hormonas son esenciales y es necesario pesarlas con una balanza analítica, pero las condiciones familiares no lo permiten. Si es posible, se pueden utilizar unidades relacionadas en lugar de preparar la solución madre, y simplemente tomar algunas para usar cada vez. La mejor manera es acudir a una tienda de suministros agrícolas (un lugar que vende pesticidas y fertilizantes allí generalmente venden hormonas agrícolas, algunas de las cuales están en ampollas, y se pueden agregar al medio de cultivo en cierta proporción). En los últimos años, algunas empresas químicas han comenzado a producir polvo de medio de cultivo de tejidos vegetales, que se puede agregar fácilmente al medio de cultivo simplemente pesando una cierta cantidad y agregando agua. Por ejemplo, el polvo de mililitro producido por Pantheon Chemical Company solo necesita pesar 40 gramos, agregar 1 litro de agua y calentar en el microondas durante 5 minutos antes de dispensarlo. Es bastante simple.
Los desinfectantes generalmente utilizan cloruro de mercurio (altamente tóxico). Si no está fácilmente disponible, se puede utilizar lejía en su lugar.
Para ajustar el pH, puedes utilizar carbonato de sodio y vinagre blanco, que se utilizan habitualmente en casa.
5. Recipientes de cultivo e instrumentos de vidrio:
Los requisitos para los recipientes de cultivo de tejidos no son elevados, siempre y cuando el vidrio sea transparente (no se permite el vidrio sódico).
Podemos ir al basurero y recoger algunas botellas de mermelada usadas. Aún mejor es la botella de salsa picante Aroma Granny, que también utilizamos en nuestro laboratorio. La película selladora de la botella puede estar hecha de plástico de polipropileno. Si es difícil de encontrar, puede usar papel de aluminio específico para hornos microondas o incluso bolsas para envolver fideos instantáneos, doblarlo en capas dobles y asegurarlo con bandas elásticas.
En casa se pueden utilizar otros instrumentos de vidrio, como vasos de precipitados, varillas de vidrio, etc., en lugar de tazas y palillos; algunos instrumentos de medición, como probetas, pipetas, etc., es mejor comprarlos en Una tienda de instrumentos de vidrio, que puede costar no más de 20 yuanes, puede configurar un gran conjunto de instrumentos de vidrio para cultivo de tejidos.
6.Otros:
También hay algunos suministros que también son necesarios. Por ejemplo, es necesario comprar una copia del papel de prueba de pH de precisión (5,4 ~ 7,0), que se puede realizar por aproximadamente 1,5 yuanes. No es necesario comprar una lámpara de alcohol. Es necesario utilizar una botella de tinta con vaso. como lámpara. Cuchillos, tijeras y pinzas son imprescindibles. Ve al puesto de herramientas del mercado de flores y podrás conseguirlos todos por 10 yuanes. Solo ten cuidado de elegir herramientas más pequeñas.
En cuanto al agua, es lógico que se deba utilizar agua destilada, pero el agua pura que bebemos en casa es más pura que el agua destilada, así que basta con tomar prestada un poco de agua potable. Hemos utilizado agua purificada de Master Kong para el cultivo de células animales y los resultados son muy buenos, sin mencionar el cultivo de células vegetales.
Los anteriores son los equipos y reactivos básicos del cultivo de tejidos, destacando principalmente sus alternativas relacionadas, ya que al ser de rápida propagación en cultivo de tejidos, sus requerimientos son bastante bajos. Nuestra cultura doméstica es diferente de la producción en fábrica. La producción en fábrica persigue una alta tasa de proliferación de plántulas de cultivo de tejidos, por lo que sus requisitos son más precisos y estandarizados. Nuestra formación familiar no necesita ser tan precisa, siempre que pueda lograr el propósito de una formación exitosa. Por supuesto, si desea mejorar la tasa de reproducción y la calidad de las plántulas de probeta, debe intentar acercarse lo más posible a los utensilios y equipos del laboratorio. Los sustitutos siempre tienen ciertos defectos.
(1) Instalaciones, artículos y sustitutos necesarios
1. Sustitutos
Se pueden utilizar refrigeradores de uso doméstico para almacenar la solución madre del medio de cultivo (4 ℃). y medicamentos que requieren almacenamiento criogénico (como los reguladores biológicos).
Autoclave: Puede utilizarse para esterilizar medios de cultivo, agua esterilizada, cristalería y otros recipientes de cultivo de tejidos. Si la dureza del agua utilizada es baja, se puede utilizar agua hervida fría para la esterilización. Evite incrustaciones en la superficie de los artículos a esterilizar.
Olla de acero inoxidable o olla de aluminio: se puede utilizar para la esterilización de medios de cultivo, agar fundido (a modo de baño maría) y recipientes de cultivo.
Bidones de aceite de cocina usado limpios: se pueden utilizar para almacenar agua destilada.
Plato pequeño de porcelana blanca: se puede utilizar para inocular y contener desinfectante (si se coloca desinfectante no ingerirlo para evitar intoxicaciones).
Lámpara fluorescente: utilizada para complementar la fuente de luz durante el proceso de cultivo de tejidos.
Latas y botellas limpias y desechadas: se pueden utilizar para cultivo de tejidos, sustituyendo matraces Erlenmeyer y tubos de ensayo.
El cultivo de tejidos se puede realizar en tu propia habitación. A la hora de preparar el medio de cultivo y la inoculación, no se apresure a hacerlo cuando haya mucha gente en casa. Si se ha instalado el aire acondicionado en la habitación, será beneficioso para el cultivo inicial, el recultivo e incluso la transición. de plántulas.
2. Utensilios caseros
(1) Producción de cajas de inoculación: la mesa de trabajo ultralimpia en el proceso de cultivo de tejidos es un equipo muy costoso. Si en su lugar se utiliza una caja de inoculación de fabricación propia, se puede ahorrar mucho dinero y será beneficioso para la popularización y aplicación.
Los materiales para las cajas de inoculación caseras pueden ser madera contrachapada, tableros de fibra, vidrio (3 mm de espesor), listones de madera (quilla para la decoración de la casa) o incluso cajas de cartón (la calidad de las cajas debería ser ligeramente mejor. como cajas de TV), también se puede utilizar plexiglás.
El tamaño de la caja de vacunación se puede realizar según las condiciones de cada familia.
Si es demasiado pequeño, es incómodo de operar, pero la desinfección es relativamente fácil y ocupa menos espacio; si es más grande, es más fácil de operar, pero el trabajo de desinfección no es fácil y ocupa mucho espacio; . Generalmente, 70cm de largo y 45cm de ancho. Una altura de 50 cm es más adecuada.
(2) Producción de incubadora: La incubadora puede reemplazar la sala de cultivo y también puede usarse para la transición de plántulas. Puede ser de cristal o se puede utilizar una pecera rectangular. Por tanto, se puede realizar con pegado de vidrio. Su tamaño se puede determinar en función del área de la sala familiar y de la cantidad de cultivo de tejidos.
3. Herramientas que deben comprarse
Balanza (500 g): se utiliza para pesar los medicamentos medianos preparados o para pesar el oro, la plata y el pesaje de arbitraje de la medicina tradicional china. medicamentos medianos, oligoelementos y reguladores biológicos o los oligoelementos y reguladores biológicos se han subcontratado en el momento de la compra. Lámpara de alcohol: utilizada para inoculación, quema, desinfección y esterilización. Embudo (también puedes utilizar el embudo que viene con el bidón de aceite de cocina): se utiliza para distribuir el medio de cultivo. 2 pinzas largas: para inoculación. 2 bisturís y varias hojas de afeitar: para la inoculación. 1 probeta graduada de 10, 50 y 100 ml de cada uno: para preparar medio de cultivo. 2 cucharas de cuernos largos: se utilizan para preparar el medio de cultivo farmacéutico. 1 pipeta de 1, 2 y 5 ml de cada una: se utilizan para preparar el medio de cultivo.
Película plástica o papel kraft resistente a altas temperaturas: se utiliza para envolver la boca del frasco de cultivo y las esquinas interiores de la caja de inoculación de fabricación propia. Anillo de goma: se utiliza para apretar la boca del frasco de cultivo. Algodón absorbente: se utiliza para la desinfección de operadores y bolas de algodón con alcohol de equipos de cultivo de tejidos. 1 trozo de papel medidor de pH (5-7): se puede cortar en pequeñas tiras para detectar el valor de pH del medio de cultivo. 1 botella de alcohol: se utiliza para lámpara de alcohol y desinfección. 1 frasco de polvo blanqueador: para esterilización. 1 frasco de formalina: se utiliza para desinfectar la caja de inoculación (2-10 horas antes de cada operación, verter 10-20 ml de formalina en un pequeño plato de porcelana blanca y retirarlo antes de la operación). Productos farmacéuticos necesarios para el medio de cultivo MS utilizados para preparar el medio de cultivo. Ácido clorhídrico e hidróxido de sodio: se utilizan para ajustar el pH. Es mejor comprar una lámpara UV para la desinfección del interior y de la caja de inoculación.
(2) Precauciones durante la operación
Las operaciones en el hogar son diferentes a las de las unidades. Se debe prestar atención a los siguientes aspectos: prestar atención a la seguridad y conservar los medicamentos correctamente. Especialmente los ancianos y los niños deben llevarse a cabo de manera cuidadosa y estricta durante la operación, los operadores de vacunación deben usar máscaras y gorros de trabajo, evitar los ventiladores eléctricos y el clima ventoso y arenoso, y los miembros de la familia deben evitar la entrada de mascotas en el hogar; el lugar de trabajo antes y después de la desinfección; los medicamentos deben pesarse con precisión; si no hay un termostato (como un aire acondicionado con temperatura controlada) en casa, evite hacerlo en pleno verano y en el frío invierno; y primero se pueden hacer flores que sean fáciles de cultivar en tejidos. Primero puedes hacer flores que sean fáciles de organizar y luego puedes hacer flores que sean difíciles de cultivar después de acumular experiencia.
1. Preparación de recipientes de cultivo y cristalería:
Primero, preparar los frascos de cultivo y el cristalería para poder preparar el medio de cultivo. Los frascos de cultivo generalmente utilizan varios frascos de mermelada, que deben remojarse en detergente durante 4 a 8 horas y luego enjuagarse varias veces con agua corriente. Otros artículos de vidrio también deben limpiarse de la misma manera hasta que no queden gotas de agua colgando de la pared interior del vidrio y se convierta en una capa de película de agua. Después de la limpieza, se debe voltear el recipiente de vidrio y verter el agua de la botella.
Los envases limpios deben protegerse del polvo y, si es posible, colocarse en una vitrina. Una forma más sencilla es cubrir el recipiente con una toalla limpia.
Las pipetas se deben limpiar utilizando una pera de succión, soplando repetidamente con agua destilada hasta que quede limpia y colocando la pipeta en un tubo largo para facilitar su uso. Generalmente las pipetas sólo se pueden utilizar una vez, es decir, es necesario limpiarlas, por lo que es necesario preparar unas cuantas pipetas más. Las recomendaciones son las siguientes: 10 ml/2 pipas, 5 ml/2 pipas, 1 ml/. 5 tubos.
2. Preparación del medio de cultivo:
El medio de cultivo clásico para el cultivo de tejidos es la fórmula MS, que se divide básicamente en: macroelementos, oligoelementos, sales de hierro, complejos orgánicos, fitohormonas. , azúcares y soportes. Las cantidades de estos ingredientes se miden en miligramos, los cuales son difíciles de pesar con una báscula normal. Para resolver este problema, podemos aumentar la dosis de cada ingrediente y prepararlo en un masterbatch, que se puede agregar en una cierta proporción cuando se usa.
El plan de preparación de una determinada solución madre de medio de cultivo en mililitros se anuncia de la siguiente manera:
Macroelementos: 66,0 gramos de nitrato de amonio
76,0 gramos de nitrato de potasio;
Cloruro de calcio anhidro 13,3 gramos;
Sulfato de magnesio heptahidratado 14,8 gramos;
fosfato dihidrógeno de potasio 6,8 gramos.
Disolver las sustancias anteriores por separado y luego combinar y ajustar el volumen a 1 litro. Tomar 25 ml por cada 1 litro de medio de cultivo estándar preparado.
Sales de hierro: 5,56 g de sulfato ferroso heptahidratado
7,46 g de etilendiaminotetraacetato disódico;
Calentar y disolver los dos anteriores, mezclar, ajustar el volumen a 1 litro, ajustar el valor del pH por debajo de 5,5 y tomar 5 ml por cada 1 litro ml ml de medio de cultivo preparado.
La cantidad de oligoelementos y complejos orgánicos es demasiado pequeña. Para simplificar, podemos utilizar en su lugar extractos vegetales o extractos de patata. Habitualmente hervimos 100 gramos de espinacas con 100 ml de agua durante 10 minutos, filtramos para dejar el filtrado y añadimos 20-50 ml de extracto por 1 litro de medio de cultivo. Del mismo modo, también se pueden hervir 100 gramos de patatas con piel en 200 ml de agua durante 15 minutos, filtrar y dejar el filtrado, y añadir de 50 a 100 ml de extracto por 1 litro de medio de cultivo.
Después de añadir los ingredientes anteriores, añadir 30g de azúcar y 7g de agar por ml de medio de cultivo.
Cabe señalar aquí que las cantidades de azúcar y agar no son fijas y deben ajustarse según sea necesario. Alternativamente, se puede usar gelatina con carragenano en lugar de agar para una mejor transparencia.
Después de añadir los ingredientes anteriores, ajustar el volumen a unos 800 ml, después calentarlo en el microondas hasta que se disuelva todo el agar. En este punto, agregue la fitohormona deseada (generalmente preparada como una solución al 0,1, por lo que cada 1 ml tomado se convierte en 1 ppm en el medio de cultivo). Luego agregar agua y finalmente llevar el volumen a 1100 ml (1,1 litros), el motivo de agregar 0,1 litros más es para compensar las pérdidas durante la preparación y esterilización. Finalmente, use ácido y álcali para ajustar el valor del pH a 5,8 ~ 6,0.
3. Utilice polvo de MS para preparar el medio de cultivo:
En la actualidad, algunas empresas químicas nacionales han desarrollado un medio de cultivo en polvo MS simple, que simplifica enormemente la preparación del medio de cultivo. Elegir el tipo de medio de cultivo según las instrucciones de las diferentes empresas. El siguiente es el polvo original de MS como ejemplo: El polvo original del medio de cultivo MS incluye macroelementos, oligoelementos, sales de hierro, complejos orgánicos, azúcar y agar. Generalmente se pesa según el método de uso, se calienta en el microondas para disolverlo y se agregan hormonas. para llevar el volumen a 1100 ml (1,1 litros), ajuste el valor del pH a 5,8~6,0.
4. Dispensar el medio de cultivo preparado en los recipientes de cultivo. Preste atención a dispensar mientras esté caliente, porque el agar se solidificará por debajo de los 40 grados centígrados. Cada botella debe llenarse con aproximadamente 1/6 ~ 1/5 y tener cuidado de no colgar el medio de cultivo en la pared exterior de la botella para evitar la contaminación. Después del embalaje, selle la boca de la botella con una película de polipropileno o una bolsa de fideos instantáneos y fíjela con un anillo de goma (intente utilizar una cámara de aire de bicicleta, que es más resistente al calor).
5. Esterilización:
Para esterilizar el medio de cultivo en una olla a presión doméstica, se recomienda acudir a una tienda de dispositivos médicos a comprar unas “tiras reactivas con efecto de esterilización”, que puede mostrar el efecto de esterilización, cambiará de color cuando se logre el efecto de esterilización. Poner el papel de prueba y el medio de cultivo en la olla al mismo tiempo, calentar hasta que salga mucho vapor, luego cortar la presión y mantener el fuego lento durante 30 a 40 minutos.
Una vez completada la esterilización, enfríe de forma natural, retire el medio de cultivo y colóquelo en un lugar fresco y libre de polvo.
6. Preparación de la caja de inoculación:
La nueva caja de inoculación debe estar limpia y ordenada, con el menor número posible de rincones muertos.
2 horas antes de cada uso, coloque todos los elementos necesarios para la operación en la caja de inoculación, luego use un vaso pequeño para agregar de 3 a 5 gramos de permanganato de potasio en la caja de inoculación y vierta de 2 a 3 ml de formaldehído en el vaso en la caja, verá aparecer vapor de formaldehído en unos segundos, de modo que todos los elementos de la caja de inoculación puedan desinfectarse por primera vez, encienda la luz ultravioleta; La lámpara ultravioleta utiliza penetración de alta presión para estimular el vapor de mercurio. La lámpara ultravioleta realiza una segunda esterilización. Después de aproximadamente 15 minutos de irradiación ultravioleta, estimulará el ozono para formar oxígeno. Después de tres esterilizaciones, la caja de inoculación básicamente puede alcanzar los estándares de esterilidad.
Quince minutos antes de la operación, vierta 5 ml de amoníaco concentrado en el vaso que acaba de evaporar el formaldehído. Debido a que el formaldehído es tóxico para el cuerpo humano, el amoníaco y el formaldehído forman una sustancia llamada "hexametilentetramina", una sustancia sólida que. Neutraliza los vapores irritantes del formaldehído. En este momento, la lámpara ultravioleta no debe apagarse, pero debe continuar irradiando hasta que se apague 5 minutos antes de la operación, mantenerla oscura durante 5 minutos y luego encender la lámpara fluorescente para su funcionamiento. La razón por la que es necesario mantenerlo oscuro durante 5 minutos es porque el efecto letal de los rayos ultravioleta sobre los microorganismos es actuar sobre la timina del ADN para formar tetrámeros, y hay una proteína reactivada por la luz en los microorganismos que puede restaurar los tetrámeros de timina. En un ambiente de luz visible, para resucitar microorganismos, esto se llama "resurrección de luz", por lo que después de apagar la lámpara ultravioleta, manténgala en la oscuridad durante unos minutos para evitar la resurrección de luz. Por lo tanto, después de apagar la luz ultravioleta, se debe mantener a oscuras durante varios minutos para evitar la aparición de reactivación de la luz.
Cómo realizar las labores de cuidado doméstico
Preparación
Los cuidados domésticos están limitados por las condiciones y es imposible preparar una gran cantidad de base de preparación de solución nutritiva. Generalmente, es apropiado 1 litro por vez. Después de hervir, use papel medidor de pH para medir, divídalo en 35 a 40 botellas, inserte tapones de algodón y envuélvalos en papel de regalo. (El tampón debe enrollarse con algodón en lugar de algodón absorbente, luego envolverse bien con una gasa y atarse con hilo de algodón). El tampón debe estar lo suficientemente apretado como para sostener el frasco del tampón en la mano y evitar que se resbale). Luego colóquelo en la olla a presión para esterilización a alta presión. Cuando la boquilla de la olla a presión rocíe vapor, abroche la válvula de presión y configure el temporizador para expulsar el aire de la válvula de presión. Manténgalo durante 15 a 20 minutos y luego gírelo. Apague el fuego cuando la presión desaparezca, abra la tapa y saque la base de nutrientes correspondiente, colóquela en la caja de inoculación para su uso posterior. Para el primer experimento, el medio de cultivo esterilizado debe dejarse durante tres a cinco días y sólo puede utilizarse cuando no se observe crecimiento de moho. Si hay crecimiento de moho, significa que el tiempo de esterilización no es suficiente y es necesario aumentarlo.
Inoculación
Coloque medio estéril, agua esterilizada, desinfectante y equipo en la caja de inoculación. Debido a que la caja de inoculación es relativamente pequeña, todos los elementos utilizados deben colocarse en un lugar apropiado. de manera ordenada y no los coloque al azar. El interior de la caja está relativamente húmedo. Cuando encienda una lámpara de alcohol, asegúrese de usar un encendedor en lugar de una cerilla. Se debe prestar especial atención a que los contenedores para aguas residuales y suciedad sean lo más grandes posible, ya que no está permitido abrirlos durante el funcionamiento. Después de colocar todos los elementos, coloque una taza magnética que contenga 10-20 ml de formalina en la caja (es mejor no usar una taza de vidrio, porque la temperatura es alta durante la reacción y es fácil de explotar). Vierta de 2 a 5 gramos de permanganato de potasio (polvo de PP) para que su vapor llene la caja para lograr el efecto de esterilización. En este momento, cierre los orificios de ventilación y los orificios de funcionamiento de la caja de inoculación para evitar que el vapor de formaldehído se disipe rápidamente. Una vez que se haya disipado el vapor de la caja, se puede iniciar la vacunación, que tardará entre 5 y 10 horas.
Al inocular, selle los orificios de ventilación y los orificios de funcionamiento de la caja de inoculación, saque la copa magnética fumigada, coloque los materiales de inoculación en la caja de inoculación, encienda la luz ultravioleta y apáguela después de quince Minutos lámpara UV, enciende la luz y comienza a trabajar. Se debe establecer el concepto de esterilidad durante la operación, todos los elementos deben considerarse portadores de gérmenes y se deben tomar precauciones en todo momento. Debido a la alta temperatura y humedad en la caja durante el trabajo, las manos son propensas a sudar, por lo que se deben limpiar los dedos con alcohol después de cada frasco de vacuna o se pueden usar guantes para los dedos. Además, preste atención a la prevención de incendios durante la operación. Debido al pequeño espacio, es fácil quemarse los dedos o hacer que el alcohol se incendie si no tiene cuidado.
Después de abrir el tapón de la botella, se debe colocar una lámpara de alcohol sobre la boca de la botella. Utilice el dedo anular y el meñique de la mano derecha para sujetar un extremo del tapón de algodón y tire suavemente del tapón de algodón. caja en el tapón de algodón Use clips para los dedos para sujetarlo después de la vacunación, queme la boca de la botella en la lámpara de alcohol, queme el tapón de algodón, luego conéctelo suavemente sobre la llama de la lámpara de alcohol, ate el papel de regalo y. marcar con un lápiz la variedad, fecha de vacunación, número de serie, etc. , luego repita con la siguiente botella.
De hecho, en comparación con la inoculación en una caja de vacunación y en un banco de trabajo limpio, las personas se sienten mucho más cómodas en el trabajo. La tasa de contaminación también es muy baja y casi no hay contaminación después de una operación especializada. Después de la inoculación, la diferenciación de los callos, la diferenciación de las plántulas y las condiciones de crecimiento son las mismas que las de la inoculación en un banco de trabajo limpio.
Cultivo
El cultivo en condiciones amateur en casa no se puede controlar especialmente, por lo que se deben aprovechar al máximo las condiciones naturales. Las botellas de cultivo después de la inoculación se pueden colocar en un lugar con luz intensa y difusa. Lugares como estanterías junto a ventanas, escritorios, etc., pero evite la luz solar directa. Generalmente, la temperatura ambiente puede crecer normalmente entre 22 y 28 grados centígrados. Las variedades no especiales no requieren cuidados especiales. Si la temperatura ambiente es demasiado baja, puede usar cartón, tiras de madera y película plástica para hacer una incubadora simple e instalar una o dos luces tejidas blancas de 15 a 25 vatios en el interior, que no solo pueden complementar la luz sino también aumentar la temperatura del cultivo. Cuando la temperatura es demasiado alta en verano, si es posible, se puede colocar en una habitación con aire acondicionado. Si no hay una habitación con aire acondicionado, será más difícil enfriarse, pero la mayoría de las plántulas de probeta pueden tolerarlo y. no morirá. Una vez que las plántulas crecen, sin duda es un placer colocarlas en una estantería o banco de trabajo y sentir la pequeña y vibrante vida que has cultivado.
Cultivo
Cuando las plántulas crecen hasta cierto punto, puede configurar algunos medios nutritivos para el enraizamiento, mover las plántulas al cultivo de raíces y, cuando crezca una cierta cantidad de raíces, se pueden cultivar. La botella está plantada. Se debe prestar atención a los siguientes aspectos al plantar plántulas en botellas: en primer lugar, se debe reducir adecuadamente la temperatura; en segundo lugar, se debe aumentar la humedad; en cuarto lugar, se debe controlar estrictamente el peligro de los hongos; suelto y transpirable; en quinto lugar, se debe garantizar una luz adecuada. Normalmente uso una mezcla de piedras plantares, aserrín y cáscaras de arroz como sustrato. Después de plantar las plántulas, rocíe las raíces con clorotalonil y cúbralas con una película plástica. Solo es necesario cubrir una pequeña cantidad de plántulas con una cubierta de vidrio. La funda se puede retirar al cabo de unos 15 días y se puede realizar el tratamiento normal.
De hecho, no es difícil realizar un entrenamiento de tejidos en casa, siempre que uses más tu cerebro y pienses en algunos métodos, es fácil de hacer. Todo es difícil al principio, pero siempre hay más soluciones que dificultades. En 1974, yo era director de un instituto de investigación sobre el tabaco en un condado. Resultó que las condiciones no lo permitían y la financiación para la investigación científica era muy escasa. Al principio, la financiación para la investigación científica durante un año era de sólo 3.000 yuanes. Ese año hice haplotipos de anteras de tabaco, cultivo de anteras de arroz, cultivo de endospermo de cítricos, cultivo de tejidos de puntas de brotes de caña de azúcar negra, cultivo de tejidos de raíces de isatis de campo, cultivo aséptico de semillas de Dendrobium officinale y fusión de células somáticas, todos lograron buenos resultados. En ese momento, muchas unidades de investigación científica en Beijing y Shanghai estaban muy sorprendidas. Pensaron que nosotros arrojamos las preciosas plántulas del cultivo de tejidos por todas partes. Pensaron que era increíble que lo que no podían hacer se pudiera hacer en nuestras montañas tan cerradas. área. Hazlo. No digo esto para alardear, pero quiero decirles a los amigos que quieran trabajar en esta industria que no menosprecien su propia energía y que no sean supersticiosos con la autoridad, siempre y cuando tengan confianza y actúen estrictamente de acuerdo con ella. Leyes científicas, nada es imposible y nada es imposible.
Selección y evaluación del efecto de los medios de cultivo domésticos
La selección de un medio de cultivo apropiado es la base para un cultivo exitoso de tejidos vegetales.
La selección de un medio de cultivo adecuado considera principalmente los dos aspectos siguientes: uno es el medio de cultivo básico; el otro es la concentración y proporción relativa de varias hormonas.
El medio MS es adecuado para la mayoría de las plantas dicotiledóneas, el medio B5 y N6 son adecuados para muchas plantas monocotiledóneas, especialmente el medio N6 es muy eficaz para el trigo, el arroz y otras plantas herbáceas. El medio blanco es adecuado para el cultivo de raíces.
Probar estos medios de cultivo para pruebas preliminares puede evitar desvíos y reducir en gran medida el consumo de tiempo, mano de obra y recursos materiales. Después de pasar una serie de pruebas preliminares, se pueden realizar pequeños ajustes en algunos ingredientes en función de las condiciones reales.
Al realizar ajustes, puede consultar las siguientes situaciones.
En primer lugar, cuando se utilizan compuestos como fuente de nitrógeno, el nitrato es más eficaz que el amonio, pero el uso de nitrato solo cambiará el valor del pH del medio de cultivo hacia una dirección alcalina si se añaden nitrato y una pequeña cantidad de amonio al mismo tiempo. se puede superar la pregunta. En segundo lugar, cuando el suministro de ciertos elementos es insuficiente, las plantas cultivadas mostrarán algunos síntomas, que pueden ajustarse según los síntomas. Por ejemplo, cuando hay falta de nitrógeno, el tejido cultivado a menudo muestra un color antocianino (rojo, violeta). -rojo), y el tejido del callo es feo para la diferenciación de las moléculas del conducto cuando falta nitrógeno, potasio o fósforo, las células crecerán demasiado y formarán un callo muy esponjoso o incluso transparente; de hierro y azufre, los tejidos que carecen de hierro y azufre perderán su capacidad. Verde, la división celular está estancada y el callo presenta síntomas de senescencia marrón cuando falta boro, la división celular tiende a ser lenta y excesivamente alargada cuando hay manganeso o molibdeno; Si falta, el crecimiento celular se ve afectado.
Los efectos de las hormonas exógenas en el medio de cultivo también provocarán algunas situaciones similares mencionadas anteriormente en el cultivo. Por lo tanto, se requiere un análisis cuidadoso y no se pueden sacar conclusiones fácilmente.