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Análisis de bandas de electroforesis en gel de agarosa de ADN

El volumen de solución de ADN agregado durante la digestión enzimática no debe ser demasiado grande; de ​​lo contrario, otros componentes de la solución de ADN interferirán con la reacción enzimática.

La actividad enzimática suele expresarse en unidades enzimáticas (U). La definición de unidad enzimática es la cantidad de enzima que puede degradar completamente 1 mg de ADN lambda en 1 hora en condiciones óptimas de reacción. Sin embargo, el ADN preparado en muchos experimentos no se degrada tan fácilmente como el ADN lambda y es necesario aumentar adecuadamente la cantidad de enzima. No es apropiado agregar demasiada enzima a la solución de reacción. Además de las consideraciones de costo, las trazas de impurezas en la solución enzimática pueden interferir con reacciones posteriores.

Datos ampliados:

Notas:

Añadir una muestra de peso molecular estándar a uno o varios pocillos, y después de la electroforesis, utilizar una banda de peso molecular conocido. una curva estándar en la posición correspondiente.

La electroforesis normalmente se detendrá cuando el tinte de seguimiento migre al pegamento a 80 °C. Tenga en cuenta que durante la electroforesis, la tapa del tanque de electroforesis debe estar bien cerrada para evitar que el líquido se evapore y reducir la posibilidad de descarga eléctrica.

Después de la electroforesis, sumerja el gel en 1 mg/L de bromuro de etidio (EB) durante 5 minutos. Las bandas de ADN serán visibles después de 5 minutos. EB se une a NDA insertándose entre pares de nucleótidos en la doble hélice. Otro método consiste en añadir EB al gel durante la electroforesis.

Enciclopedia Baidu-Electroforesis en gel de agarosa