¿Cuál es la diferencia entre RTPCR y PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real?
RT-PCR generalmente se refiere a la PCR con transcripción inversa.
El proceso operativo básico consiste en transcribir de forma inversa el ARN extraído y luego utilizar el ADNc obtenido como plantilla para diseñar cebadores para la amplificación. Este es un método común para detectar la expresión génica.
La PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real también se denomina PCR en tiempo real. Real-timePCR detecta el progreso de la PCR en tiempo real a través de la señal de fluorescencia durante el proceso de amplificación de la PCR. En la fase exponencial de la amplificación por PCR, existe una relación lineal entre el valor Ct de la plantilla y el número de copias inicial de la plantilla, por lo que se convierte en una base cuantitativa.
Principio de PCR:
La replicación semiconservativa del ADN es una forma importante de evolución y generación biológica. El ADN de doble hebra puede desnaturalizarse y desenrollarse en hebras simples bajo la acción de diversas enzimas. Con la participación de la ADN polimerasa, puede copiarse en dos copias moleculares idénticas según el principio del apareamiento de bases complementarias.
Los experimentos descubrieron que el ADN puede desnaturalizarse y fundirse a altas temperaturas, y puede replegarse en dobles hebras cuando se enfría. Por lo tanto, la desnaturalización y renaturalización del ADN se puede controlar mediante cambios de temperatura, y la ADN polimerasa y el dNTP pueden completar la replicación in vitro de genes específicos agregando cebadores diseñados.
Sin embargo, la ADN polimerasa se inactiva a altas temperaturas, por lo que es necesario añadir una nueva ADN polimerasa en cada ciclo, lo que no sólo es engorroso de operar, sino también costoso, lo que restringe la aplicación y el desarrollo de la tecnología de PCR. .