¿Cuál es el principio básico de la coprecipitación?

* * * El método de precipitación COIP es una técnica experimental comúnmente utilizada para detectar interacciones entre proteínas e identificar su formación de complejos en las células. El principio básico es el siguiente:

Lisis celular: primero, las células o muestras de tejido que contienen proteínas diana se disuelven para liberar proteínas intracelulares. Por lo general, esto implica el uso de un tampón de lisis celular que contiene agentes lisantes de proteínas e inhibidores de proteasa para proteger la integridad de las proteínas.

Inmunoprecipitación: A continuación, los anticuerpos específicos dirigidos contra la proteína de interés se unen a las proteínas de la muestra. Esto se puede lograr recubriendo previamente anticuerpos en perlas de proteína A/G Sefarosa o perlas de proteína A/G Sefarosa. Los anticuerpos se unen a proteínas diana para formar complejos inmunes.

Lavado: Someter la muestra a un paso de lavado para eliminar proteínas y otras impurezas que no estén específicamente unidas. La composición del tampón de lavado se puede ajustar según los requisitos experimentales y generalmente incluye solución salina, detergentes e inhibidores de proteasa.

Elución: utilice tampón de elución para eluir complejos inmunes de perlas de agarosa o perlas de agarosa de proteína A/G. Los tampones de elución a menudo contienen soluciones salinas altamente concentradas o agentes disociadores de proteínas específicos para interrumpir la unión del anticuerpo a la proteína objetivo.

Análisis: La muestra eluida contiene otras proteínas que interactúan con la proteína diana. Estas muestras a menudo se analizan más a fondo mediante transferencia Western y espectrometría de masas para identificar las proteínas precipitadas.

A través del método de precipitación * * * se pueden identificar proteínas que interactúan con proteínas diana y estudiar más a fondo sus funciones intracelulares y mecanismos reguladores.