Cordyceps sinensis

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Cordyceps sinensis también se conoce como Cordyceps sinensis, o Cordyceps sinensis para abreviar. En la actualidad, se ha informado que más de 400 especies de Cordyceps sinensis en el mundo parasitan insectos, arañas y otros organismos y producen cuerpos fructíferos. Se han registrado 68 especies en China. Según los conceptos de algunas personas y estudiosos nacionales y extranjeros, cualquier combinación de hongos parasitada por Cordyceps sinensis y que pueda producir cuerpos fructíferos se denomina colectivamente Cordyceps sinensis. En cuanto a la medicina tradicional china en mi país, la gran mayoría de los estudiosos y personas de nuestro país, y el Cordyceps sinensis al que se hace referencia en este artículo, se refieren a la combinación insecto-bacteria formada por Cordyceps sinensis (Berkeley) saccardo (1878), que es Sólo se distribuye en la hierba alpina de la meseta Qinghai-Tíbet y áreas marginales de mi país, y parasita las larvas de Insecta, Lepidoptera y Mythidae. ;Otros grupos sólo se llaman Cordyceps sinensis, no el auténtico Cordyceps sinensis.

1. La historia medicinal y el estado de desarrollo de Cordyceps sinensis y sus insectos huéspedes.

El texto más antiguo sobre Cordyceps sinensis medicinal se puede encontrar en el "Compendio de Materia Médica" de Wang An (1694). ) de la dinastía Qing: "Cordyceps sinensis" Tiene un sabor dulce, puede proteger los pulmones y los riñones, detener el sangrado y resolver la flema y aliviar el parto y la tos. Los mejores se producen en Jiading, Sichuan. Como viejos gusanos de seda con los pelos moviéndose, si no se comen en verano, se convertirán en hierba. Más tarde, el "Compendio de Materia Médica" de Zhao Xuemin (1756) registró: "Cordyceps sinensis y ginseng tienen el mismo efecto y pueden curar. varias deficiencias." El libro también describe en detalle el origen, método de consumo y dosis de Cordyceps sinensis en 1757. El libro "Compendio de Materia Médica" también afirma: "Cordyceps protege los pulmones y los riñones, detiene el sangrado y resuelve la flema. "Más tarde, cientos de libros antiguos de medicina china, como "Qian Nang", "Literature Research", "Sichuan Annals" y "Compendium of Materia Medica", registraron Cordyceps sinensis.

La historia de las exportaciones de China Cordyceps sinensis como material medicinal en países extranjeros Es más antiguo que los registros escritos. Fue introducido en Japón desde Zhejiang entre 1400 y 1465 y fue ampliamente consumido por el misionero europeo Jean-Gartley Tzku en 1723. ) trajo Cordyceps recolectado del noroeste de China a. Francia Leomuir presentó este Cordyceps en la reunión de licenciatura de la Academia Francesa de Ciencias y lo incluyó en el acta de la reunión. En 1943, Berkeley identificó el Cordyceps chino y lo nombró oficialmente Cordyceps chino en 1878. Clasificado como Cordyceps por Sacdo, investigación. Cordyceps sinensis ha atraído la atención en el extranjero, y el Cordyceps sinensis chino también se ha hecho famoso en todo el mundo.

Cordyceps sinensis ha gozado de una gran reputación por estar distribuido únicamente en China durante cientos de años. Los chinos y asiáticos como una preciosa medicina tradicional china nutritiva comparable al ginseng natural y la asta de venado. Tiene efectos medicinales suaves y se ha utilizado durante mucho tiempo en medicina y alimentación en nuestro país. Es un tónico de alta calidad que proviene de la misma fuente. y se puede consumir durante todo el año. No tiene efectos secundarios y es adecuado para personas de todas las edades. Más de 70 textos médicos chinos antiguos resumen las funciones del Cordyceps sinensis de la siguiente manera: “Puede reponer el yin y el yang y curar la fatiga y la tos. . Varias deficiencias; sus ventajas son las mismas que las del ginseng y la asta de terciopelo, pero su naturaleza suave lo hace adecuado para personas frágiles y enfermas de todas las edades... "Desde la fundación de la República Popular China, ha habido más En mi país existen más de 200 libros de medicina que detallan la eficacia y usos del Cordyceps sinensis. "La Farmacopea de la República Popular China" registra que su función es "tonificar los pulmones y riñones, detener hemorragias y resolver flemas" y puede usarse para tos crónica, tos y hemoptisis, impotencia y espermatorrea, y con el desarrollo de la medicina en el país y en el extranjero y la popularidad de la medicina tradicional china en el mundo. Con la popularidad gradual en el mundo, en los últimos años la gente ha descubierto que las funciones y. Los efectos de Cordyceps sinensis son cada vez más extensos. Los estudios han demostrado que tiene efectos sedantes, hemostasia, anticonvulsivos, reduce la presión arterial, mejora la isquemia miocárdica, agregación antiplaquetaria, antienvejecimiento, regula la inmunidad humana y contra el cáncer de pulmón, linfoma y cáncer de hígado. En la actualidad, ha atraído cada vez más la atención de investigadores en los campos farmacéutico y biológico tanto en el país como en el extranjero, y los informes de investigación relevantes han aumentado significativamente.

La primera descripción científica y publicación pública de la distribución del género Bat Moth en la meseta Qinghai-Tíbet fue Poujade1886, una especie de murciélago polilla encontrada en las montañas nevadas del condado de Baoxing, provincia de Sichuan. Posteriormente, estudiosos como Alpharaky y Staudinger descubrieron dos especies en el Tíbet en 1889 y 1895 respectivamente, a saber: H. nebulosus (homófono: H. luteus) y H. varians. En 1909, Oberthur estaba clasificando materiales medicinales y especímenes de plantas traídos del Tíbet y Sichuan de China en la península de Armórica francesa y descubrió una polilla murciélago adulta, a la que llamó H. Armoricanus en honor a la península. Pero cuando se publicó la nueva especie, se explicó que el origen de esta polilla murciélago puede ser la meseta china de Sichuan-Tíbet porque aún no se ha encontrado en la península.

Posteriormente, hasta 1959, investigadores del Instituto de Zoología de la Academia de Ciencias de China recolectaron una gran cantidad de adultos y larvas de polilla de murciélago en Kangding, Sichuan. Después de que Zhu Hongfu los identificara, eran la misma especie que la polilla de murciélago encontrada en el. Península de Amarica en Francia, de ahí el nombre. Es Cordyceps sinensis, y se identifica como uno de los insectos hospedadores de Cordyceps sinensis, un producto de especialidad en mi país. Hasta ahora, se han descubierto 37 especies de insectos hospedadores Cordyceps sinensis exclusivos de China en la meseta Qinghai-Tíbet y sus áreas marginales.

2. Estado actual del cultivo artificial e industrialización de Cordyceps sinensis y polilla murciélago

(1) Estado actual del cultivo artificial de Cordyceps sinensis sexual

En el En los últimos 20 años, más de 60 unidades de investigación científica y miles de personas han realizado muchas investigaciones, experimentos y exploraciones en el cultivo artificial de Cordyceps sinensis. Yunnan, Sichuan y otros lugares han logrado una experiencia exitosa en el cultivo de tipos sexuales en áreas pequeñas a gran altitud. Sin embargo, debido a muchos factores como el ciclo largo, pocos objetivos de promoción, grandes inversiones y menores retornos que la recolección natural en áreas de gran altitud. no han sido promovidos a gran escala. En las zonas de media y baja altitud de Yunnan, Sichuan, Zhejiang, Gansu, Qinghai, Beijing, Fujian, Guangdong, Guizhou, Guangxi y otras provincias (ciudades y distritos) también se han llevado a cabo investigaciones sobre el cultivo artificial de Cordyceps sinensis sexual. Durante muchos años, aunque muchos de ellos se han logrado resultados muy gratificantes en algunos aspectos, por ejemplo, las provincias de Yunnan y Sichuan han reproducido con éxito insectos polilla en Kunming, Chengdu, Chongqing y otros lugares. En Zhejiang y otros lugares, los insectos polilla del murciélago se han reproducido con éxito en interiores; sin embargo, debido a que las dificultades de la inoculación de insectos y el crecimiento repetido y por lotes de sus crías no se han resuelto, no se puede considerar que su cultivo sea exitoso; Todavía está lejos del objetivo de cultivar artificialmente Cordyceps sinensis sexual en áreas pequeñas, lotes pequeños y varias veces en altitudes bajas. Aunque varias empresas afirman haber cultivado con éxito Cordyceps sinensis sexual en lotes en altitudes medias y bajas, la credibilidad científica real es extremadamente baja. Porque:

(1) Todavía nadie ha podido aislar y cultivar el auténtico hongo Cordyceps de manera estable y a largo plazo (es decir, que genera repetidamente una gran cantidad de esporas en el medio de cultivo). ). Se han cultivado sustratos en Qinghai, Yunnan, Sichuan, Beijing y otros lugares, pero hay pocas o ninguna ascospora y el crecimiento es inestable. Esto no significa que se haya dominado la tecnología de cultivo artificial sexual en altitudes medias y bajas.

(2) La tecnología de cultivo asexual artificial de Cordyceps sinensis es relativamente fácil de dominar. La inoculación de larvas de polilla de murciélago en interiores puede provocar infección y entrar en la etapa rígida, pero es raro completar la forma sexual y. crecen estroma y ascosporas.

(3) Además de los factores ambientales como la altitud, el clima, el suelo, la presión del aire, etc., ¿existen infecciones multibacterianas entre las bacterias? Si se trata de una infección combinada, ¿qué bacterias desempeñan un papel clave? ¿A qué hora funciona con Cordyceps sinensis? Espera, la pregunta no está clara.

Por lo tanto, el cultivo por lotes y repetido de Cordyceps sinensis en zonas de media y baja altitud requiere mucha investigación y trabajo experimental. Incluso el cultivo artificial a gran escala de Cordyceps sinensis en zonas de gran altitud requiere muchos experimentos técnicos. Por lo tanto, todavía es muy difícil y lejano realizar una producción industrial o a gran escala de Cordyceps sinensis sexual cultivado artificialmente.

(2) La situación actual del cultivo artificial de Cordyceps sinensis asexual

Debido a la dificultad de cultivar artificialmente Cordyceps sinensis sexual, en los últimos 10 años, la mayoría de las unidades e investigadores científicos que llevan El cultivo artificial de Cordyceps sinensis se ha centrado en La investigación y aplicación de la asexualidad. Dado que la tecnología de cultivo asexual de Cordyceps sinensis es fácil de dominar, y la mayoría de los hongos aislados de Cordyceps sinensis recolectados de la naturaleza tienen propiedades físicas y químicas y efectos farmacológicos similares a los componentes sexuales de Cordyceps sinensis, los hongos que se aíslan a sí mismos se identifican como los etapa asexual de Cordyceps sinensis en varios lugares, y se han instalado fábricas una tras otra para producir polvo bacteriano para su desarrollo y aplicación. En la actualidad, existen 31 especies de Cordyceps sinensis aisladas de Cordyceps sinensis en 9 géneros en la naturaleza, de las cuales 16 se han encontrado en más de 40 provincias (ciudades), incluidas Beijing, Jilin, Shanxi, Shanghai, Qinghai, Zhejiang, Fujian, Jiangxi. , Guangdong, Yunnan y Guizhou. El cultivo de fermentación profunda a gran escala y el cultivo sólido de micelio y conidios se utilizan como alternativas al Cordyceps sinensis sexual. Algunos fabricantes han iniciado la producción industrial a gran escala, como las cápsulas Lingzhi, las cápsulas Jinshuibao, las cápsulas Ningxinbao, Xinganbao y Cordyceps sinensis. Hay más de 20 productos que incluyen esencia de pollo, cápsulas de Cordyceps, vino de Cordyceps, vino tónico de ginseng de Cordyceps, etc., con un valor de producción anual que oscila entre 10 millones de yuanes y cientos de millones de yuanes. Además, debido al corto ciclo de propagación artificial y al alto rendimiento, las capas de micelio y meristemo tienen un gran potencial para el desarrollo y aplicación en el futuro como alternativas sexuales a Cordyceps sinensis.

3. Tecnología de cultivo artificial de Cordyceps Sinensis y insectos polilla murciélago

(1) Cría de insectos huéspedes y tecnología de reproducción de Cordyceps Sinensis Para cultivar Cordyceps Sinensis artificialmente, se necesita una gran cantidad de huéspedes. Los insectos, las polillas murciélago, deben criarse artificialmente primero.

Las polillas murciélago pasan el 98% de su vida en el suelo, con sólo 2,5 a 13 días de vida adulta en el suelo. Por tanto, la cría artificial y el manejo de este tipo de insectos se realiza principalmente en el suelo.

1. Herramienta para alimentar huevos de polilla de murciélago.

(1) Herramienta para alimentar huevos de polilla de murciélago. Hay dos formas de criar huevos de polilla murciélago. Una es utilizar una placa de Petri de vidrio con un diámetro de 15 a 20 cm, cubrirla con 2 o 3 capas de papel de filtro y colocar un trozo de algodón absorbente en la placa para mantener la humedad. Cada plato puede contener entre 200 y 500 huevos. Liu Fa no puede observar esto, pero es difícil captar la humedad. En segundo lugar, utilice 10 cm en la capa de suelo a una profundidad de 1 cm. Cada frasco puede alimentar entre 300 y 1000 huevos. Al alimentar, siempre que las plantas no se marchiten, no es necesario agregar humedad. Este método tiene una alta tasa de eclosión, pero es difícil observar y trasplantar pares de larvas.

(2) Existen cuatro tipos de herramientas de alimentación para las larvas.

A. Tanque de insectos de vidrio: Utilice un tanque de vidrio de 18-25 cm, cada tanque puede criar de 10 a 30 larvas.

B. Caja subterránea para la cría de insectos: la caja mide generalmente entre 30 y 50 cm de alto, 20-25 cm de ancho y 3-5 cm de espesor. El marco de la caja de alimentación está soldado con barras de acero y las barras de acero superiores están hechas de manijas para facilitar el levantamiento; los lados anchos son de vidrio de 3 a 5 mm para facilitar la observación de las actividades de los insectos; la parte inferior y ambos lados están equipados con 16-; Malla de cobre para facilitar la penetración de la humedad. Luego llene la tierra, plante plantas alimenticias y almacene de 20 a 50 larvas en cada caja. Excave un surco un poco más grande y más profundo que la caja de reproducción en el suelo sólido, coloque la caja de reproducción en la ranura y levante la caja de reproducción durante el proceso. Observación en el suelo, limpie la suciedad del vidrio exterior para que pueda ver claramente la actividad larvaria.

C. Jaula grande para insectos: en condiciones seminaturales, elija un sitio con buen drenaje y tierra suelta, excave una zanja profunda de 12 a 15 m de largo, 2 a 3 m de ancho y 4 cm de profundidad, y acolche la jaula. Fondo y lados Gasa de nailon (es mejor usar capas dobles para que los insectos no salgan fácilmente), luego saque con una pala el humus suelto y llénelo, plante alimento para las larvas y colóquelo para que las larvas se alimenten, cada cuadrado. El metro es suficiente. Este método es bueno para la reproducción a gran escala, pero difícil de observar.

d Utilice varias macetas para la cría desnuda: lave el alimento para plantas y póngalo en la maceta, coloque las larvas en la maceta para que crezcan y cubra la boca de la maceta con una capa de tela negra o. Papel negro para bloquear la luz. Observe la historia de vida de Liu Fa, pero preste atención a los cambios frecuentes en la alimentación y la eliminación de las heces.

(3) Herramientas de alimentación para pupas y adultos. Haga una caja para insectos de 50 cm de largo, 50 cm de ancho y 55-60 cm de alto. La parte inferior está sellada con una placa de hierro delgada o una malla de cobre de doble capa; la parte superior y los lados circundantes están envueltos con alambre de hierro o alambre de nailon, y se puede hacer una puerta de malla móvil en el frente. Coloque de 10 a 20 cm de tierra en el fondo de la caja, plante y coloque las pupas y los adultos en la tierra. Este método se puede utilizar para plantaciones y alimentación densas.

2. Puntos clave de la tecnología de alimentación

(1) Seleccionar el suelo. El suelo es el lugar de actividad más importante en la vida de las polillas murciélago. Si las condiciones del suelo son adecuadas para la vida de los insectos es una de las claves para la tasa de supervivencia de la reproducción artificial. El suelo de pradera alpina es el más adecuado para el crecimiento de las polillas murciélago; en segundo lugar, el suelo mixto de playa y pradera, en tercer lugar, el suelo de bosque marrón y marrón oscuro en las montañas, y otros suelos no son buenos para este insecto.

(2) Selección de alimentos. A las larvas les gusta alimentarse de las tiernas raíces y brotes de Polygonum bulbifera, Polygonum bulbifera, Astragalus membranaceus y ruibarbo. Debido a que las polillas murciélago son insectos omnívoros, los pastos (como la cebada de las tierras altas, el trigo, los brotes de arroz, etc.) se pueden usar en lugares donde no hay tales plantas. Mejoramiento de raíces jóvenes de plantas Brassicaceae y Cyperaceae. En zonas de baja y media altitud (temperaturas adecuadas para vivir), pueden crecer con normalidad si se les alimenta con ruibarbo, zanahorias, rábanos, boniatos (batatas), patatas, manzanas, etc. , y lo mejor es utilizar ruibarbo, zanahorias y batatas.

(3) Selección de temperatura y humedad. La polilla murciélago es un insecto que tolera las bajas temperaturas y teme las altas. Es más adecuado para vivir y crecer entre 15 y 19 °C. Este insecto es más adecuado para una humedad del aire del 75 % al 85 % y un contenido de humedad del suelo del 40 % al 45 %.

3. Tecnología de gestión

(1) Etapa adulta. Los gusanos adultos no comen ningún alimento y pueden sobrevivir y poner huevos con normalidad siempre que se mantengan hidratados y a una temperatura adecuada. Pero el hábitat de la polilla está relacionado con la cantidad de huevos que pone.

Los adultos prefieren poner huevos en las raíces de plantas como Polygonaceae y alimentarse de rododendros y larvas de polilla de murciélago, por lo que es mejor plantar varias plantas relacionadas antes de que las polillas se apareen y pongan huevos. Además, no debe haber ninguna luz brillante.

(2) Etapa de huevo. Para que los huevos eclosionen con normalidad, debemos dominar la temperatura y la humedad adecuadas.

(3) Estado larvario. Dado que las larvas tienen un largo período de crecimiento y paredes delgadas, deben criarse con cuidado para minimizar la rotación, además de la necesaria observación, cambios de suelo y cambios de alimento. La clave para criar larvas es la primera etapa de eclosión. Las larvas recién nacidas deben recibir suficiente alimento tierno y con poca humedad; lo mejor es tamizar la tierra para evitar rayar el cuerpo principal con objetos ásperos y duros. Además, para evitar que los alimentos y la tierra se enmohezcan, se debe utilizar luz ultravioleta para esterilizarlos durante 15 minutos antes de reemplazarlos. La tierra también se puede exponer al sol durante 1 a 2 horas antes de su uso.

(4) Estado de pupa. Al criar pupas, primero compacte la tierra en el recipiente para criar pupas y luego use palos de madera del grosor de la pupa para construir artificialmente una cámara de tierra. Las cámaras de tierra están ligeramente inclinadas y tienen entre 2 y 3 cm de profundidad. En cada cámara se coloca una pupa. Al liberar la pupa, la cabeza de la pupa mira hacia la superficie del suelo y la parte superior se cubre con tierra fina. La temperatura y la humedad de la pupa se pueden controlar entre 80%-85% de la humedad atmosférica, 42%-45% de la humedad del suelo y 18-22°C.

[2] Tecnología de cultivo artificial de Cordyceps sinensis

Para obtener cepas puras de Cordyceps de invierno y principios de verano es necesario realizar aislamiento artificial, purificación, rejuvenecimiento y conservación.

1. Tecnología y condiciones de separación de Cordyceps sinensis

(1) Requisitos del material. La obtención de cepas puras requiere materiales estrictos; en términos generales, si se utiliza el método de separación de bloques de tejido de Cordyceps sinensis, el mejor material de separación es el material recolectado desde el final de 65438+10 hasta 165438+10 cada año. de las praderas alpinas de la meseta Qinghai-Tíbet Está empezando a helar. Durante este período, Cordyceps sinensis acaba de ser infectado con larvas de polilla y ha entrado en la etapa muerta por un corto tiempo. Los tiernos cogollos acaban de crecer a 0,2-0,5 cm de la cabeza de la polilla y hay muy pocas otras bacterias en el. polilla. Si los materiales se recolectan en mayo o junio del año siguiente, habrá una variedad de bacterias diversas vivas o saprofitas en los zombis y subasientos, lo que dificultará la obtención de cepas puras. Si se utilizan ascosporas para aislamiento y cultivo, es mejor recolectar el material aislado a mediados o finales de julio de cada año, cuando las ascosporas están parcialmente maduras.

(2) Método de operación. Hay tres pasos.

A. Aislamiento de zombies (es decir, esclerocios): antes de la separación, enjuague la superficie principal con agua y luego enjuáguela con agua esterilizada 2-3 veces, use 0,65 min438 + 0 % -0,2 % de cloruro de mercurio; La solución desinfecta la superficie de los materiales separados durante aproximadamente 3 a 5 minutos; luego la limpia con agua esterilizada. Selecciona la parte delantera delimitada por el pecho y los pies. Utilice un bisturí para cortar la epidermis, evitando el tracto digestivo, corte las hifas del hemocele en formas de sésamo y presiónelas en el medio de cultivo plano, 1-2 piezas por plato. Cultivo a 15-19°C. Cuando la colonia crezca hasta 0,2-0,5 cm, seleccione una pequeña cantidad de micelio y purifíquela de 2 a 4 veces en el medio de cultivo en placa. Después de confirmar que no hay otras bacterias extrañas, transfiéralas a tubos de ensayo para su almacenamiento y cultivo.

b. Separe los cogollos: corte los cogollos lavados de la parte superior del zombie, póngalos en una solución de cloruro de mercurio al 0,1% para esterilizarlos durante 2-3 minutos, lávelos con agua esterilizada y córtelos. medio El bloque de tejido se presionó en el medio de cultivo; las condiciones de cultivo fueron las mismas que a.

C. Aislamiento de esporas de Ascomycota: Utilice una bolsa de papel transparente para cubrir las esporas de Ascomycota maduras y permita que las esporas de Ascomycota reboten y se adhieran a la bolsa de papel. Luego, la bolsa de papel que contenía las esporas de Ascomycota se sumergió en una solución de glucosa al 25%, las esporas se lavaron, se cultivaron a 15-19°C y se inspeccionaron microscópicamente todos los días. Cuando las túnicas hayan germinado, use una micropipeta para pipetear las esporas individuales en un plato para su cultivo. Las condiciones de cultivo fueron las mismas que a.

Como alternativa, puedes llevar el Cordyceps sinensis maduro entero al interior, envolver a los zombis o incluso las esporas de los insectos con papel de seda, dejando solo las lombrices preñadas, y colocar los portaobjetos horizontalmente en la habitación estéril en cualquier momento. tiempo. Mantenga la humedad del cuerpo; verifique bajo el microscopio todos los días. Cuando las ascosporas reboten en el portaobjetos de vidrio, use una micropipeta para aspirarlas en el medio de cultivo de la placa de Petri para que las condiciones de cultivo sean las mismas. .

(3) Selección del medio de cultivo.

El medio agar patata dextrosa (PDA) es un medio universal para todos los hongos Cordyceps. Puede utilizarse en las primeras etapas de aislamiento y cultivo, pero el crecimiento de las cepas no es muy vigoroso y sí. propenso al envejecimiento y la degradación.

b Medio de enriquecimiento (1): 10 g de proteína pluripotente de cordón umbilical, 50 g de glucosa, 1 g de hidrogenofosfato dipotásico, 0,5 g de sulfato de magnesio, 30 g de pupas de gusano de seda vivas, 0,5 μg de auxina, 20 g de agar, 1000 ml de agua, pH: 5.0.

Medio enriquecido (ii): 40 g de proteína en conserva, 40 g de glucosa, 100 g de patatas frescas peladas, 1 g de hidrogenofosfato dipotásico, 0,5 g de sulfato de magnesio, 10 g de pasta de ternera, 0,5 μg de auxina, polilla de murciélago, 30 g de larvas vivas ( polvo), 20 g de agar, 1000 ml de lixiviado de suelo de pradera alpina, etc.

En medio mejorado, las colonias crecen más vigorosamente y más rápidamente que en medio PDA. Jiafu ⅱ es mejor que ⅰ.

2. Características de crecimiento En el aislamiento y cultivo de Cordyceps sinensis es necesario dominar la utilización de la temperatura, el valor del pH, la luz, las fuentes de carbono y nitrógeno y las sales inorgánicas.

(1) Efectos de diferentes temperaturas sobre el crecimiento micelial. A Cordyceps le gustan las bajas temperaturas. Puede crecer lentamente entre 0 y 4 ℃; la tasa de crecimiento se acelera entre 5 y 8 ℃; 10-19 ℃ es el rango de crecimiento y desarrollo adecuado para esta cepa; Cuando la temperatura supera los 20 °C, el micelio crece rápidamente y las colonias cambian de blanco a gris negruzco o marrón y comienzan a mutar, por lo que no son adecuadas para el cultivo a alta temperatura.

(2) Requisitos del valor de pH. Cordyceps sinensis es un hongo ácido con un valor de pH óptimo de 5,0 a 6,0. Cuando el valor del pH es inferior a 4,5 y superior a 6, crecerá lentamente o no crecerá en absoluto con el aumento o la disminución.

(3) La influencia de la luz. Esta cepa se adapta a poca luz y luz corta en las primeras etapas de germinación de ascosporas y crecimiento de hifas, y se adapta a luz intensa en la etapa posterior. En el cultivo artificial, el micelio, los conidios y la matriz tienen fototaxis obvia. Crecen densamente en el lado soleado y escasamente en el lado iluminado. Varias bacterias cultivadas en un ambiente completamente oscuro son delicadas, alargadas y escasas.

(4) Aprovechamiento de fuentes de carbono. Cordyceps sinensis puede utilizar una variedad de fuentes de carbono, pero crece más rápido cuando se usan juntas glucosa y maltosa. También crece bien cuando se usa glucosa sola, seguida de almidones como las patatas y la sacarosa.

Cordyceps sinensis es un hongo que crece desde un huésped parásito hasta un estado saprofito, por lo que puede aprovechar diversas fuentes de nitrógeno orgánico. Los gusanos vivos son los mejores; una mezcla de peptona y pasta de levadura también es ideal para el crecimiento, seguido de usar cada uno por separado, luego pasta de carne, etc. El nitrógeno inorgánico como el sulfato de amonio y el nitrato de potasio tienen tasas de utilización bajas.

Tiene una cierta demanda de nutrientes de ceniza y crece vigorosamente en un medio que contiene trazas de sulfato de magnesio e hidrogenofosfato dipotásico, seguido de dihidrogenofosfato de potasio, sodio, calcio, hierro, cobre y otros. utilizarse sales inorgánicas.

3. Después de la separación y purificación mediante el método de cultivo, Cordyceps sinensis se puede utilizar para diversos experimentos y aplicaciones de producción ampliadas.

(1) Generalmente existen tres métodos para expandir su producción: cultivo estático sólido, cultivo en matraz agitado y cultivo de fermentación por aireación en tanque grande.

A. Cultivo estático: Se utiliza principalmente para cultivo sólido, como cultivo en tubo, cultivo en matraz Erlenmeyer, cultivo de arroz, etc. En el cultivo estático, las bacterias pueden crecer normalmente siempre que la temperatura y la luz estén bien controladas. Una vez que los conidios de la pendiente estén maduros, se pueden almacenar en el refrigerador a 1-2°C durante 8-14 meses, o se pueden usar directamente como semillas para la producción.

B. Cultivo en agitación: se encuentran disponibles tanto el cultivo líquido como el cultivo de propagación a pequeña escala. Agite el medio y reste el agar del medio sólido. Lo mejor es elegir una incubadora oscilante de temperatura constante, poner el medio de cultivo líquido en un matraz Erlenmeyer e inocular las bacterias sólidas en el tubo de ensayo para el cultivo. Después de una agitación continua, los componentes del medio de cultivo líquido se mezclan uniformemente sin precipitación y, al mismo tiempo, se promueve el contacto y el intercambio gas-líquido, lo que permite que el oxígeno ingrese al medio de cultivo líquido, lo que es beneficioso para el crecimiento del micelio y la formación de conidios. .

C. Cultivo de fermentación por aireación en tanques grandes: cuando se produzca micelio, conidios y otros polvos bacterianos a gran escala, se debe utilizar un cultivo de fermentación por aireación en tanques grandes. En este método, la aireación se realiza mediante succión o descompresión con bomba de vacío, y las bacterias se eliminan a través de un filtro y luego se introducen en un medio de cultivo líquido en un tanque para el crecimiento y desarrollo de Cordyceps sinensis.

(2) Proceso de fermentación. Separación y purificación de Cordyceps sinensis natural → semillas en pendiente de tubo de ensayo → semillas de primer nivel en líquido oscilante → semillas de segundo nivel → tanque de fermentación de semillas pequeñas → tanque de fermentación de producción → concentración → pulverización y secado de polvo → polvo bacteriano terminado.

La temperatura de fermentación de Cordyceps Sinensis en el tanque es de 20-25 ℃, la presión del tanque es de 392,3-686,5 kPa (0,4-0,7 kg/cmz) y la tasa de ventilación es de 0,5-1,ovvm* . El medio de cultivo líquido inyectado en el tanque de fermentación debe ser del 65% al ​​75% de la capacidad del tanque. La cantidad de inoculación es 65438 ± 00 %, la velocidad de agitación es 65438 ± 080 rpm, el tiempo de cultivo es 72-96 horas y luego se coloca en un tanque para concentración y pulverización de polvo.

(3) Medio de fermentación multiusos.

8% patatas frescas (peladas), 2% sacarosa, 0,5% almidón de maíz, 1% pupa de gusano de seda en polvo, 0,4% peptona, 0,2% sulfato de amonio, valor de pH 5,5-6,0.

(4) Normas para productos de cultivo de fermentación. Los conidios son esporóforos femeninos casi completamente separados. Cuando el número de esporofitos no aumenta significativamente, el número de conidios por mililitro es de 65,438 ± 0,8 mil millones ~ 2,5 mil millones. El azúcar residual es inferior al 1%; cuando el nitrógeno amino es inferior a 0,2 mg/ml, puede convertirse en el líquido bacteriano terminado.

4. Puntos clave de la inoculación de Cordyceps: La inoculación de insectos hospedadores con esporas de Cordyceps sexuales o asexuales es una medida clave para el cultivo artificial de Cordyceps sexual y el rejuvenecimiento de cepas asexuales.

(1) Periodo de devolución de llamada. La clave para la reconexión de Cordyceps sinensis es seleccionar el período antibacteriano débil del insecto huésped, uno es el período de muda y el otro es el período en el que la actividad de alimentación de las larvas es intensa y la tasa de daño por fricción es alta;

(2) Método de amarre. Hay dos tipos.

A. Método de pulverización: cuando las larvas de la polilla del murciélago estén en el estadio 4-6 y estén mudando 65,438+0/3 o más, concentre las larvas y rocíelas con una solución de glucosa al 5%-65,438+00%. Sobre insectos o alimentos que contengan ascosporas o conidias. Después de la inoculación, la solución bacteriana se deja secar sobre el cuerpo del insecto durante unos 30 minutos y las larvas regresan al suelo para vivir de forma natural. Este método tiene una alta tasa de infección, pero la desventaja es que las larvas son difíciles de sacar del suelo y concentrarse. Cuando se concentran, las larvas tienen la costumbre de matarse entre sí. Después de ser picado por un insecto, es fácil infectarse con bacterias y morir. Cuando las hifas de Cordyceps sinensis no llenan la cavidad del cuerpo, el cuerpo del insecto lesionado se pudrirá y no podrá formar un cuerpo rígido (esclerocios).

B. Método de contacto natural: criar larvas de polilla de murciélago en una gran superficie de suelo seminatural y tomar pequeñas muestras periódicamente para observar el crecimiento de las larvas. Cuando la mayoría de las larvas sean aptas para la infección, plante e inocule tierra fina con una solución de remojo de plantas alimenticias, extiéndala uniformemente sobre la superficie de los insectos que se alimentan y luego rocíe agua para permitir que las bacterias penetren en el suelo, exponiendo las larvas a la infección durante actividades de alimentación. La tasa de infección de este método no es muy alta, pero una vez infectado, Cordyceps sinensis crece bien y las larvas de polilla de murciélago no infectadas también pueden crecer y reproducirse normalmente.