¿Cómo preparar gel de agarosa de bajo punto de fusión?
⑴ Preparación de gel de agarosa: pesar 0,3g de agarosa, colocarla en un erlenmeyer, añadir 30ml de tampón TBE o TAE, colocarlo en un erlenmeyer y colocar Añadir 30 ml de TBE o tampón TAE al matraz Erlenmeyer y calentar el matraz Erlenmeyer en el microondas hasta que la agarosa se disuelva. Agregue bromuro de etidio a la solución de gel de agarosa enfriada a aproximadamente 65 °C y mezcle bien.
(2) Preparación de la lámina de goma:
①Tome el tanque interior de plexiglás, lávelo y séquelo
②Coloque el tanque interior de plexiglás horizontalmente sobre el molde; Instale el deflector y coloque el peine. Aspire una pequeña cantidad de solución de agarosa para sellar el borde de la membrana y permita que se solidifique. Coloque un peine a 0,5 ~ 1,0 mm de la placa inferior para que se pueda formar un orificio de muestra perfecto después de agregar agarosa. Si el peine está demasiado cerca de la placa de vidrio, al sacarlo se romperá el fondo del pocillo, permitiendo que la muestra se escape entre el gel y la placa de vidrio.
(3) Vierta la solución de agarosa tibia restante en la película de pegamento y extienda lentamente el pegamento hasta que se forme una capa de pegamento uniforme en toda la superficie de la placa de plexiglás. El espesor del gel está entre 3 y 5 mm. Compruebe si hay burbujas de aire debajo o entre los dientes del peine.
(4) Déjelo reposar a temperatura ambiente durante unos 30 minutos. Después de que esté completamente solidificado, extraiga suavemente el peine para formar orificios de carga de muestra espaciados en la placa de goma. Después de preparar el pegamento, coloque el tanque interior de plexiglás recubierto con pegamento en un tanque de electroforesis que contenga 0,5 ~ 1 × TAE (ácido trisacético) o TBE (ácido trisbórico) y la superficie del pegamento supere 1 mm.
(Nota: El bromuro de etidio es un mutágeno fuerte moderadamente tóxico. Se deben usar guantes cuando se usan soluciones que contienen este tinte. La descontaminación debe realizarse después de su uso. Generalmente se almacenan 10 mg/ml. La solución se prepara con agua y almacenado a temperatura ambiente en la oscuridad. La concentración final es de 0,5 μ g/ml)