¿A qué se debe prestar atención al utilizar el método de dilución en serie para determinar la concentración inhibidora mínima de los fármacos?

Utilice agar MH y prepárelo según las instrucciones del producto. El pH es de 7,2 a 7,4. Neisseria gonorrhoeae se basa en agar GC, con 1 aditivo agregado; otros estreptococos usan agar MH que contiene 5 (V/V) de sangre de oveja (al detectar sulfamidas, use sangre de caballo disuelta).

2. Preparación de placas de agar que contienen fármacos

Según el diseño experimental, añadir diferentes concentraciones de fármacos antibacterianos diluidos al agar MH que ha sido calentado, disuelto y equilibrado en un baño de agua a 45 ~ 50 ° C, mezcle bien y vierta en una placa esterilizada. El espesor del agar es de 3 a 4 mm. La placa de agar farmacológico se prepara generalmente en una proporción de 1:9 y el rango de concentración del fármaco es. seleccionado según sea necesario. Las placas de agar medicado preparadas deben colocarse en bolsas de plástico selladas y almacenarse en el refrigerador a una temperatura de 2 a 8 °C durante 5 días.

3. Preparación e inoculación del inóculo

Preparar una suspensión bacteriana con una concentración equivalente a 0,5 turbidez estándar Maxwell, y luego diluirla 1:10. Utilice un inoculador multipunto para extraer la solución bacteriana preparada (aproximadamente 1 ~ 2 μl) e inocularla en la superficie de la placa de agar. El número de bacterias por punto es de aproximadamente 104 UFC, formando una placa con un diámetro de 5 ~ 8 mm. Después de la inoculación, se incuba a 35°C durante 16 ~ 20 horas (el tiempo de incubación para Staphylococcus aureus resistente a meticilina y resistente a vancomicina). enterococos debe ser de más de 24 horas) y observar el resultado. Las bacterias Neisseria y Streptococcus se incubaron con 5 dióxido de carbono y Helicobacter pylori en un ambiente microaerofílico.

4. Juicio de resultados

Coloque la placa sobre una superficie oscura y no reflectante y juzgue que la prueba ha terminado. La concentración mínima del fármaco que inhibe el crecimiento bacteriano es la MIC. Se observó un ligero crecimiento bacteriano en placas de agar que contenían trimetoprima o sulfonamida, y como concentración final se utilizó la concentración más baja del fármaco que inhibió el crecimiento bacteriano en más del 80% en comparación con el control de crecimiento.

Si crecen más de dos colonias en una placa de agar con una concentración de fármaco superior al nivel terminal, o en una placa de agar con una concentración de fármaco baja pero alta, se debe comprobar la pureza del cultivo o repetirlo. prueba.