¿Cuál es la proporción entre el tampón de carga y la muestra de ADN durante la electroforesis?

Es decir, añadir 1 parte de colorante 6×Loading a 5 partes de solución de ADN. Por ejemplo, agregue 2 ul de tinte de carga 6X a una escalera de ADN de 10 ul.

La solución de carga de colorante de carga 6X contiene Tris-HCl 10 mM (PH8,0), EDTA 1 mM, 2,5 % de azul de bromofenol y 4 % de sacarosa.

Concentración de gel o volumen de carga recomendado: 2,0 ~ 2,5 % de gel de agarosa (concentración final de bromuro de etilo: 0,5 ug/ml/pozo de gel);

Durante el almacenamiento o uso de marcadores de ADN, se debe evitar la congelación y descongelación repetidas; durante la congelación a largo plazo, se puede formar un gradiente de concentración de ADN, por lo que se debe agitar bien y centrifugar brevemente después de la descongelación.

Datos ampliados

1 y funciones del buffer de carga:

Los indicadores en (1) son azul de bromofenol y azul de xileno, que muestran el progreso de la electroforesis, de modo que Podemos detener la electroforesis a tiempo.

(2) El componente glicerol del interior puede aumentar la densidad de la muestra, haciendo que la densidad de la muestra sea mayor que TAE, asentándose así en el orificio de la muestra y evitando que la muestra flote fuera del orificio de la muestra.

2. Se añade SDS a algunos buffers, como se suele decir. SDS promueve principalmente la desnaturalización de la polimerasa porque la polimerasa inacabada se unirá a la doble cadena del ADN y afectará su tasa de migración. El lisado después de la lisis celular se calienta bajo una carga de 65438 ± 000 °C para terminar la reacción enzimática y evitar la degradación de la proteína extraída.

Enciclopedia Baidu-Búfer de carga

Enciclopedia Baidu-Escalera de ADN de 100 pb