Principios de la cromatografía en gel

El principio de la cromatografía en gel es que la fase estacionaria de la cromatografía en gel es un material de gel poroso y la fase móvil es una solución acuosa o un disolvente orgánico, que se separa según el tamaño de diferentes volúmenes moleculares. Las moléculas pequeñas pueden difundirse en los espacios del gel y pasar a través de ellos, y los picos son las más lentas; las moléculas medianas solo pueden atravesar parte de los espacios del gel, pasando a una velocidad media, y las moléculas grandes quedan excluidas y los picos son los más rápidos; Las moléculas son pequeñas, por lo que se pueden separar en masa los compuestos con masas moleculares relativas entre 100 y 105; Hay picos al final y antes del volumen muerto;

La cromatografía en gel, también conocida como cromatografía de exclusión por tamaño, se basa en el principio de los tamices moleculares y se utiliza principalmente para separar macromoléculas orgánicas, como proteínas, péptidos, polisacáridos, etc. Tiene un alto efecto de separación de sustancias poliméricas. Debido a su gran diámetro, las macromoléculas no pueden entrar fácilmente en los microporos de las partículas de gel y sólo pueden distribuirse entre las partículas, por lo que se mueven hacia abajo más rápido durante la elución.

Las sustancias moleculares pequeñas no solo pueden difundirse en los espacios entre las partículas de gel, sino que también pueden entrar en los microporos de las partículas de gel, es decir, entrar en la fase de gel. En su movimiento descendente, se difunden desde un gel hacia los espacios entre las partículas y luego hacia las otras partículas del gel. Por lo tanto, continúan entrando y difundiéndose, y la velocidad de movimiento descendente de las sustancias moleculares pequeñas va por detrás de la de las sustancias moleculares grandes, de modo que las moléculas grandes de la muestra salen primero de la columna cromatográfica, las moléculas medianas salen después y las moléculas medianas salen después. las moléculas más pequeñas salen al final.

Efecto de tamiz molecular: cuando una solución de muestra que contiene varias moléculas fluye lentamente a través de la columna de gel, cada molécula se mueve de dos maneras diferentes al mismo tiempo, a saber, movimiento vertical hacia abajo y movimiento de difusión no direccional. Debido a su gran diámetro, las macromoléculas no pueden entrar fácilmente en los microporos de las partículas de gel y sólo pueden distribuirse entre las partículas, por lo que se mueven hacia abajo más rápido durante la elución.

Las sustancias moleculares pequeñas no solo pueden difundirse en los espacios entre las partículas de gel, sino que también pueden entrar en los microporos de las partículas de gel, es decir, entrar en la fase de gel. En su movimiento descendente, se difunden desde un gel hacia los espacios entre las partículas y luego hacia las otras partículas del gel. Por lo tanto, continúan entrando y difundiéndose, y la velocidad de movimiento descendente de las sustancias moleculares pequeñas va por detrás de la de las sustancias moleculares grandes, de modo que las moléculas grandes de la muestra salen primero de la columna cromatográfica, las moléculas medianas salen después y las moléculas medianas salen después. las moléculas más pequeñas salen al final. Este fenómeno se llama efecto tamiz molecular.