Al realizar una transferencia Western de muestras de tejido, ¿hay algún consejo para manipular las muestras?
Al realizar una transferencia Western en muestras de tejido
La muestra de tejido se debe triturar, homogeneizar y sonicar.
La solubilidad de las proteínas será mejor, la centrifugación debe ser suficiente, las proteínas de membrana requieren una extracción más vigorosa y las proteínas de membrana de baja abundancia pueden requerir una extracción paso a paso (ultracentrifugación). Otro punto es que la actividad de la proteasa en el tejido es más fuerte, así que preste atención a inhibir la actividad de la proteasa (agregue PMSF y un cóctel inhibidor de la proteasa). Generalmente, el 5% de leche desnatada en polvo es un agente sellador de uso común. Si el anticuerpo primario es un anticuerpo policlonal, BSA también es una buena opción.