¿Qué debo hacer si hay colas en la electroforesis en gel de agarosa?

Para aquellos de ustedes que han realizado electroforesis en gel de agarosa, ¿se han encontrado a menudo con el fenómeno de la cola de electroforesis? Creo que mucha gente asiente como loca. Hay relaves de plásmidos, relaves de ADN e incluso relaves de PCR son los más comunes. Olvídate de la verificación, la clave es que las fotos no se ven bien cuando las tomas, y publicar artículos o algo así afectará demasiado tu calidad. A continuación, les contaré por qué la electroforesis en gel de agarosa colas según mi propia experiencia. Si hay alguna deficiencia, espero que puedan comentarla y compensarla (debo ser mi maestra cuando estemos juntos). !

¿Por qué la electroforesis en gel de agarosa emborrona?

1. Hay muchos factores que provocan colas en los productos de PCR, que se pueden resumir en un solo factor: la amplificación inespecífica excesiva. Las razones pueden ser:

(1) La plantilla es impura: purifique la plantilla

(2) El Buffer es inapropiado: reemplace el Buffer

(3 ) La temperatura de recocido es demasiado baja: aumente la temperatura de recocido adecuadamente

(4) Demasiada enzima: use una cantidad adecuada de enzima o reemplácela con otra enzima

(5) La concentración de dNTP y Mg2+ es demasiado alta: reducir adecuadamente el dNTP y la concentración de iones de magnesio

(6) Demasiados ciclos: reducir el número de ciclos

(7) La la cantidad de plantilla es muy pequeña o la cantidad de cebadores es demasiada: aumente la cantidad de plantilla y reduzca la cantidad de cebadores

2. Este fenómeno ocurre a menudo al extraer plásmidos. Puede deberse a la concentración de la muestra. es demasiado alto. Esta situación es simple, sólo dilúyala.

3. El tailing ocurre a menudo al extraer ADN genómico. La razón más probable es que el ADN extraído está dopado con proteína, y la proteína arrastrará la natación del ADN. Por tanto, debemos prestar atención a la operación de extracción de genes para reducir la aparición de impurezas como las proteínas.

4. La muestra está rota o degradada

5. Hay ARN presente: el trozo delante del ADN suele ser ARN sin limpiar. Después de la purificación y el tratamiento con ARNasa, desaparece<. /p>

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6. Problemas con el sistema de electroforesis: Observe si su marcador también tiene fenómeno de cola, como control

(1) Contaminación del tampón de electroforesis TAE o TBE: . Se recomienda cambiar el buffer.

(2) La muestra flotó durante la carga. Se recomienda aumentar la cantidad de tampón de carga y agregar la muestra con cuidado.

(3) El voltaje es demasiado alto: reduzca el voltaje adecuadamente

(4) Según el tamaño del fragmento de ácido nucleico, aumente la concentración del gel de manera adecuada. La elección de la concentración del gel depende del tamaño de las moléculas de ADN. La concentración de gel necesaria para separar fragmentos de ADN de menos de 0,5 kb es del 1,2 al 1,5 %.

La concentración de gel necesaria para separar moléculas de ADN de más de 10 kb es del 0,3 al 0,7 %. dos. La concentración de pegamento requerida es del 0,8 al 1,0%. /s/QZbboqNBDce2QFPD8JxFCw