Kits de detección de ADN comúnmente utilizados en medicina forense y sus principios

La fragmentación del ADN de la cromatina nuclear es un signo de apoptosis. Cuando las células experimentan apoptosis, las endonucleasas se activan y degradan selectivamente el ADN de la cromatina para formar fragmentos grandes de 50 a 300 kb, que luego se rompen en las uniones de los nucleosomas para formar ADN de 180 a 200 pb o un fragmento integral del mismo. Estos fragmentos de ADN se pueden extraer de las células y mostrarse como escaleras de ADN mediante electroforesis en gel de agarosa y tinción con bromuro de etidio, de modo que se pueda juzgar la aparición de apoptosis. El kit de detección en escalera de ADN KGI proporciona un método simple y rápido para extraer ADN de cromatina, aumentando la tasa de recuperación de pequeños fragmentos de ADN y mejorando así la sensibilidad de la detección.

Procedimientos operativos

1. Recoger 105~106 células mediante centrifugación (1500 × g, 5 min) en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml.

2. Lavar las células dos veces (centrifugar a 1500 xg durante 5 min) y desechar el sobrenadante.

3. Añadir 100 μL de tampón de lisis a las células precipitadas, agitar vigorosamente en un agitador vórtex durante 5 min, 1000. × g, centrifugar a 1000 × g, transferir el sobrenadante a otro tubo de microcentrífuga de 1,5 ml.

4. Agregar 100 μL de tampón de lisis para precipitar, repetir el paso anterior y combinar los dos sobrenadantes; p>

5. Agregue 20 μl de solución A al sobrenadante combinado, luego agregue 20 μl de enzima A y reaccione a 55 °C durante 65438 ± 0 horas;

6. C 65438 ± 0 horas;

7. Agregue 130 μL de precipitante y 950 μL de etanol frío, mezcle y coloque a -20 °C durante más de 1 hora o durante la noche;

8,4 ℃. 12000-14000 rpm, centrifugar durante 15-30 minutos, desechar con cuidado el sobrenadante y recoger el ADN precipitado;

9. Añadir 0,5 ml de etanol frío al 70%, lavar el precipitado de ADN y lavarlo a 12000 rpm. - Centrifugar a 14000 rpm durante 20 minutos;

10. Desechar el sobrenadante, secar el precipitado de ADN a temperatura ambiente durante 10 minutos, agregar 10-15 μL de tampón TE, agitar bien para disolver el ADN

11. Tome la muestra de 10-15 μL anterior, agregue 2-3 μL de tampón de carga y electroforesis en gel de agarosa al 1,5% (se agregan 0,5 μg/mL de bromuro de etidio tanto al gel como al tampón de electroforesis TBE);

Electroforesis a 65438±02,5V/cm durante 65438±0 horas, observada y fotografiada bajo luz UV.